- Nhiệt độ (oC) - Tốc độ khuấy (v/p) - Tốc độ sục khí (l/l/p) - Áp suất khí (bar) - Oxy hòa tan (%)
- Tỷ lệ formalin 37% (%) và thời gian bất hoạt (giờ) và thời gian bất hoạt (giờ) theo đậm độ vi khuẩn (tế bào/ml) LÊN MEN TINH CHẾ BẤT HOẠT TÁCH LỌC - Hàm lƣợng kháng nguyên Vi PS/loạt nuôi cấy
- Kiểm tra chất lƣợng kháng nguyên Vi PS nguyên Vi PS
VẮC XIN - Kiểm tra chất lƣợng vắc xin Thƣơng hàn Vi PS
- Nhiệt độ (oC) - Thời gian (giờ) - Thời gian (giờ)
SẢN XUẤT THEO THÔNG SỐ ĐÃ CHỌN CHỌN
Sản xuất thử nghiệm ở nồi lên men 7 lít và 75 lít
44
2.2.2. Kiểm tra chủng giống Thƣơng hàn S. Typhi Ty2 (Phụ lục 9) [5,7,11,19, 25,94,108,109] 25,94,108,109]
Chủng Thƣơng hàn S. Typhi Ty2 dùng cho sản xuất vắc xin Thƣơng hàn Vi PS đƣợc kiểm tra định kỳ hàng năm về đặc điểm hình thái, đặc tính sinh vật hóa học, khả năng ngƣng kết với kháng huyết thanh đặc hiệu và chủng phải đạt yêu cầu quy định của Dƣợc điển châu Âu và Tổ chức Y tế Thế giới:
- Tính chất nuôi cấy, hình thái bắt màu đặc trƣng của S. Typhi. - Sử dụng glucose nhƣng không sinh hơi.
- Thử nghiệm oxidase âm tính.
- Canh khuẩn ngƣng kết đặc hiệu với kháng huyết thanh Vi hoặc khuẩn lạc có halo trên thạch huyết thanh.
2.2.3. Nghiên cứu sản xuất thử nghiệm ở nồi lên men 7 lít và 75 lít [94]
2.2.3.1. Sản xuất thử nghiệm kháng nguyên Vi PS ở nồi lên men 7 lít
Dùng chủng vi khuẩn C. freundii WR 7011 để sản xuất thử nghiệm kháng nguyên Vi PS.
Sản xuất thử nghiệm 2 loạt ở nồi lên men 7 lít với các thông số kỹ thuật:
- Tỷ lệ giống 2 % - Môi trƣờng Phụ lục 6 - Thể tích môi trƣờng 5 lít - Lƣu lƣợng khí 5 – 8 lít/phút (Tốc độ sục khí 1 – 1,6 l/l/p) - Tốc độ khuấy 600 – 800 vòng/phút - Áp suất bề mặt 0,1 bar
- Nhiệt độ nuôi cấy Nhân giống ở 37oC và lên men ở 32oC - Bất hoạt vi khuẩn 2% (v/v) formalin 37%
45
2.2.3.2. Sản xuất thử nghiệm kháng nguyên Vi PS ở nồi lên men 75 lít
Sản xuất thử nghiệm với các thông số kỹ thuật: Chủng vi khuẩn S. Typhi Ty2 - Tỷ lệ giống 4 % - Môi trƣờng Phụ lục 7 - Thể tích môi trƣờng 45 lít - Lƣu lƣợng khí 30 – 50 lít/phút (Tốc độ sục khí 0,67 – 1,11 l/l/p) - Tốc độ khuấy 500 – 1100 vòng/phút - Áp suất bề mặt 0,1 – 0,45 bar
- Oxy hòa tan 10%
- Nhiệt độ nuôi cấy Nhân giống ở 37oC và lên men ở 32oC - Bất hoạt vi khuẩn 0,5% (v/v) formalin 37%
- Thời gian nuôi cấy 6 – 8 giờ
2.2.4. Đánh giá vắc xin Thƣơng hàn Vi PS trên thực địa
Vắc xin đã sản xuất đƣợc đánh giá chất lƣợng trên thực địa qua thử nghiệm lâm sàng trên ngƣời về tính an toàn và khả năng sinh miễn dịch bởi đơn vị độc lập trƣớc khi đƣa vắc xin vào sử dụng.
2.2.4.1. Nội dung a. Đối tƣợng a. Đối tƣợng
Là những ngƣời tình nguyện khỏe mạnh, không bị tiêu chảy kéo dài trong 6 tháng trƣớc khi đƣợc tiêm vắc xin, không có bệnh đƣờng hô hấp, bệnh mãn tính, sốt trong 1 tuần trƣớc khi đƣợc tiêm vắc xin, phụ nữ đang mang thai, để loại trừ những trƣờng hợp chống chỉ định.
Bảng 2.2. Số lƣợng ngƣời lớn và trẻ em đƣợc tiêm vắc xin Thƣơng hàn Vi PS Vắc xin Thƣơng hàn Vi PS Ngƣời lớn trên 15 tuổi Trẻ em từ 5 – 14 tuổi
DAVAC – Việt Nam 49 47
Sanofi Aventis - Pháp 52 49
Tổng cộng 101 96
Địa điểm Trƣờng trung cấp Phú Thọ
Xã kim Đức, huyện Phong Châu, Phú Thọ
46
b. Vắc xin dùng cho thực địa
* Vắc xin Thƣơng hàn Vi PS lô 06 (DAVAC - Việt Nam).
* Vắc xin Thƣơng hàn Vi PS (TYPHIM Vi) lô 1226 (Sanofi Aventis - Pháp).
c. Phƣơng pháp * Tổ chức thực địa * Tổ chức thực địa
- Thực địa theo phƣơng pháp mù kép: Vắc xin và mẫu huyết thanh đƣợc mã hóa. - Quá trình thực địa chia làm 2 giai đoạn:
Giai đoạn 1: Thực hiện trên đối tƣợng ngƣời lớn.
Kiểm tra tính an toàn và khả năng sinh miễn dịch.
Giai đoạn 2: Thực hiện trên đối tƣợng trẻ em sau khi có kết quả giai đoạn 1. Kiểm tra tính an toàn và khả năng sinh miễn dịch.
* Tiêm vắc xin và lấy máu
- Tiêm vắc xin: Mỗi đối tƣợng đƣợc tiêm 1 liều vắc xin Thƣơng hàn Vi PS 0,5 ml có chứa 25 g kháng nguyên Vi PS tinh khiết.