+ Tủa kháng nguyên Vi PS thô bằng Cetavlon 0,4% ở 4oC qua đêm theo tỷ lệ 1:1 để có nồng độ cuối cùng là 0,2%.
+ Tủa đƣợc ly tâm 4.000 gở 10oC trong 2 giờ, thu kháng nguyên Vi PS thô.
55
c. Phƣơng pháp tinh sạch kháng nguyên Vi PS
Phƣơng pháp nhằm loại bỏ các kháng nguyên không đặc hiệu nhƣ ADN, ARN, protein và thu kháng nguyên đặc hiệu là kháng nguyên Vi PS.
* Tách Cetavlon khỏi tủa kháng nguyên Vi PS - Cetavlon + Nguyên tắc
Dùng NaCl để tách Cetavlon khỏi tủa kháng nguyên Vi PS – Cetavlon vì Na+ có ái lực ion mạnh hơn Cetavlon và khi dùng nồng độ cao Na+ sẽ đẩy Cetavlon ra và liên kết với kháng nguyên Vi PS bởi lực tƣơng tác ion tạo tủa kháng nguyên Vi PS – COONa (Hình 2.5).
Tủa Vi PS thô - Cetavlon Tủa Vi PS thô - Na Cetavlon
Hình 2.5. Sơ đồ phản ứng tách kháng nguyên Vi PS khỏi tủa kháng nguyên Vi PS thô-Cetavlon bằng NaCl
+ Tiến hành
- Rửa mẫu kháng nguyên Vi PS thô bằng nƣớc cất và NaCl 0,1 M. Ly tâm 4.000g ở 10oC trong 1 giờ để thu cặn (kháng nguyên Vi PS thô – Cetavlon) và bỏ nƣớc nổi. - Hoàn nguyên tủa kháng nguyên Vi PS thô – Cetavlon trong dung dịch NaCl 1 M, khuấy ở 4oC qua đêm. Ly tâm 19.000 g ở 10oC trong 2 giờ để thu cặn (kháng nguyên Vi PS thô – Na) và bỏ nƣớc nổi.
* Tinh sạch kháng nguyên Vi PS
+ Tủa mẫu Vi PS bằng ethanol 99,99% đến nồng độ 25%
Phƣơng pháp nhằm loại bớt những kháng nguyên không đặc hiệu là những phân tử lớnnhƣ ADN, ARN, protein có trong kháng nguyên Vi PS thô.
56