+ Canh thang TSB: 140 lít. + Dung dịch glucose: 10 lít.
40
Tổng thể tích môi trƣờng là 160 lít, lọc vô trùng qua hệ thống lọc Cartridge với kích thƣớc lỗ lọc 0,2 m và đƣợc đƣa vào nồi lên men 300 lít.
Lấy mẫu môi trƣờng để kiểm tra pH và kiểm tra hóa học.
2.1.5.4. Dung dịch
a. Dung dịch NH4OH 16%
NH4OH 32% 1000 ml
Nƣớc cất 1000 ml
1 lít nƣớc cất đƣợc hấp vô trùng (ở nhiệt độ 121oC trong 1 giờ) hòa với 1 lít NH4OH 32%, lắc đều.
b. Dung dịch antifoam
Silicon - chất chống bọt 30 g Paraffin 60 ml Nƣớc cất 100 ml
Lần lƣợt pha 30 gam Silicon - chất chống bọt và 60 ml paraffin vào 100 ml nƣớc cất. Hấp 121o
C trong 15 phút, hấp 2 lần trong 2 ngày liên tiếp trƣớc khi lên men.
c. Dung dịch Cetavlon 0,4%
Cetavlon 4 g Nƣớc cất vừa đủ 1 lít
Hòa tan 4 gamCetavlon trong 1 lít nƣớc cất ở nhiệt độ khoảng 50 - 60oC.
d. Dung dịch NaCl 1 M và 0,1 M * Dung dịch NaCl 1 M * Dung dịch NaCl 1 M
NaCl 58,5 g Nƣớc cất vừa đủ 1 lít Hòa tan 58,5 g NaCl trong 1 lít nƣớc cất.
* Dung dịch NaCl 0,1 M
41 Nƣớc cất vừa đủ 1 lít e. Dung dịch đệm Tris 50m M Tris 6,05 g HCl 37% 0,3 – 0,5 ml Nƣớc cất vừa đủ 1 lít pH = 7,4
Hòa tan 6,05 g Tristrong 1 lít nƣớc cất. Chỉnh pH của dung dịch bằng dung dịch HCl 37% cho đến khi pH = 7,4.
f. Dung dịch MgSO4.7H2O 0,5 M
MgSO4.7H2O 123,3 g Nƣớc cất vừa đủ 1 lít Hòa tan 123,3 g MgSO4.7H2O trong 1 lít nƣớc cất.
g. Dung dịch CH3COONa.3H2O bão hòa và CH3COONa.3H2O bão hòa 10% * Dung dịch CH3COONa.3H2O bão hòa * Dung dịch CH3COONa.3H2O bão hòa
CH3COONa.3H2O 1,2 kg Nƣớc cất vừa đủ 1 lít
Lắc đều 1,2 kg CH3COONa.3H2O trong 1 lít nƣớc cất, để phòng ấm 37o C cho đến khi CH3COONa.3H2O tan hoàn toàn.
*Dung dịch CH3COONa.3H2O bão hòa 10%
Dung dịch CH3COONa.3H2O bão hòa 100 ml Nƣớc cất vừa đủ 1 lít
h. Phenol Phenol 1 kg CH3COONa.3H2O bão hòa 10% 300 ml CH3COONa.3H2O bão hòa 10% 300 ml
Cho 1 kg phenol vào chai thủy tinh. Cho tiếp CH3COONa.3H2O bão hòa 10% vào. Lắc đều cho đến khi phenoltan hoàn toàn. Dùng ngay sau khi pha.
42
2.2. Phƣơng pháp nghiên cứu 2.2.1. Sơ đồ nghiên cứu 2.2.1. Sơ đồ nghiên cứu
SƠ ĐỒ TỔNG QUÁT
Khảo sát các thông số nuôi cấy ở
nồi lên men 300 lít
Sản xuất theo thông số đã chọn
GIẤY PHÉP LƯU HÀNH LƯU HÀNH
VẮC XIN
Xây dựng quy trình sản xuất
Hình thành quy trình sản xuất ở quy mô nồi lên men 300 lít
Sản xuất thử nghiệm ở quy mô nhỏ
Đánh giá sự ổn định của quy trình sản xuất
Đánh giá kết quả thử nghiệm
Đánh giá hiệu quả vắc xin trên thực
địa
43
SƠ ĐỒ NGHIÊN CỨU
S. Typhi Ty2