- Những phân tử kháng nguyênVi PS có kích thƣớc khác nhau sẽ tách ra khi chạy qua lọc gel.
10.9. Thử nghiệm chất gây sốt
Thử chất gây sốt là phƣơng pháp sinh học dùng để đánh giá đặc tính gây sốt
của vắc xin Thƣơng hàn Vi PS dựa trên sự tăng thân nhiệt của thỏ trƣớc và sau khi mẫu thử đƣợc tiêm vào tĩnh mạch tai của thỏ.
10.9.1. Tiến hành
- Dùng thỏ khỏe mạnh, trƣởng thành, đực hoặc cái (không mang thai), cân nặng từ 1,5 kg – 3,0 kg, không bị tụt cân 1 tuần trƣớc khi thử nghiệm.
- Đo nhiệt độ 3 lần mỗi lần cách nhau 60 phút. Những thỏ có nhiệt độ chênh lệch giữa các lần đo ≥ 0,6oC không dùng vào thí nghiệm.
* Thực hiện thí nghiệm
- Đo nhiệt độ thỏ trƣớc khi tiêm: Để ổn định trong phòng thí nghiệm ít nhất 90 phút, đo nhiệt độ thỏ 2 lần cách nhau 30 phút, nhiệt độ ban đầu là giá trị trung bình của 2 lần đo. Dùng những thỏ có chênh lệch nhiệt độ giữa 02 lần đo ≤ 0,2oC và nhiệt độ ban đầu trong khoảng 38,0o
C – 39,8oC. Mỗi mẫu thử nghiệm đƣợc tiêm cho một nhóm 03 thỏ có sự chênh lệch nhiệt độ giữa các thỏ ≤ 1oC .
- Pha vắc xin Thƣơng hàn Vi PS: Trong nuớc muối sinh lý 0,85% + Liều để thử chất gây sốt : 25 ng/ml = 0,025 g/ml.
+ Từ 50 g/ml pha loãng thành 0,025 g/ml theo tỷ lệ 1/2000.
- Liều lƣợng tiêm và cách tiêm: Mỗi thỏ đƣợc tiêm 1 ml/1 kg thỏ. Lô vắc xin thử đƣợc làm ấm từ 37 – 38oC.
- Theo dõi nhiệt độ của thỏ sau khi tiêm: Sau khi tiêm thỏ 60 phút đo nhiệt độ thỏ lần đầu, sau đó cứ 60 phút đo một lần trong vòng 3 giờ sau khi tiêm. Nhiệt độ cao nhất của thỏ trong vòng 3 giờ sau khi tiêm là nhiệt độ tối đa.
10.9.2. Kết quả
- Tính kết quả: Tính nhiệt độ trung bình của từng thỏ trƣớc khi tiêm mẫu thử. Tính hiệu số giữa nhiệt độ tối đa sau khi tiêm và nhiệt độ ban đầu trƣớc khi tiêm. - Đánh giá kết quả:
+ Đáp ứng của mỗi thỏ là hiệu số của nhiệt độ tối đa sau khi tiêm thuốc đem thử và nhiệt độ ban đầu. Đáp ứng của mỗi thỏ bằng 0 nếu nhiệt độ tối đa sau khi tiêm thuốc đem thử chỉ bằng hoặc thấp hơn nhiệt độ ban đầu.
+ Nhiệt độ chênh lệch của một thỏ 0,6oC và tổng số đáp ứng của 3 thỏ 1,3o C thì thuốc đạt yêu cầu thử chất gây sốt. Thử nghiệm không đạt nếu tổng số đáp ứng của 3 thỏ > 2,4oC.
+ Nếu tổng nhiệt độ của 3 thỏ nằm trong khoảng 1,3oC đến 2,4oC thì làm lại thí nghiệm trên 03 thỏ khác. Tổng số đáp ứng cộng dồn của 6 thỏ phải 3,0o
C. Thử nghiệm không đạt nếu tổng số đáp ứng của 6 thỏ > 4,1oC.
+ Nếu tổng nhiệt độ của 6 thỏ nằm trong khoảng 3oC đến 4,1oC thì làm lại thí nghiệm lần cuối cùng trên 03 thỏ khác. Tổng số đáp ứng cộng dồn của 9 thỏ phải 4,9oC. Thử nghiệm không đạt nếu tổng số đáp ứng của 9 thỏ > 4,9oC.
10.9.3 Tiêu chuẩn
Vắc xin không đƣợc có chất gây sốt.