- Những phân tử kháng nguyênVi PS có kích thƣớc khác nhau sẽ tách ra khi chạy qua lọc gel.
b. Súc vật thí nghiệm
10.14. Định lƣợng kháng thể Vi bằng phƣơng pháp ELISA 1 Phƣơng pháp
10.14.1 Phƣơng pháp
- Phủ phiến 100 µl trong 1 giếng với dung dịch kháng nguyên Vi PS có nồng độ 2 µl/ml trong dung dịch đệm PBS, lắc nhẹ. Ủ qua đêm ở nhiệt độ phòng.
- Rửa 3 lần bằng dung dịch rửa.
- Thêm vào tất cả các giếng lỗ 100 µl/giếng dung dịch đệm khóa phiến. - Ủ 1 giờ ở 37o
C.
- Rửa 3 lần bằng dung dịch rửa.
- Pha các huyết thanh thử, độ pha loãng tối thiểu là 1:20.
Thêm vào cột đầu tiên 200 µl/giếng của mẫu chuẩn và mẫu thử. Pha loãng bậc 2 từ cột 2 tới cột 11. Ủ 4 giờ ở 37oC.
- Rửa 3 lần bằng dung dịch rửa.
- Cho 100 µl/giếng của dung dịch cộng hợp đã pha loãng 1/500 trong đệm pha cộng hợp. Ủ 4 giờ ở 37oC.
- Rửa 3 lần bằng dung dịch rửa.
- Thêm 100 µl/giếng dung dịch cơ chất.
- Để ở nhiệt độ phòng từ 15 – 20 phút, đọc kết quả ở bƣớc sóng 405nm.
10.14.2. Đánh giá kết quả
- Đối tƣợng đƣợc xem là có đáp ứng kháng thể kháng Vi khi nồng độ kháng thể (tính bằng đơn vị ELISA) lớn hơn kháng thể nền 4 lần.
- Tính kết quả bằng phần mềm Kineticalc V2.03 (Bio –TeK).
- Dùng phần mềm so sánh kết quả STATA Corporation (Mỹ) để phân tích so sánh kết quả đáp ứng miễn dịch giữa 2 loại vắc xin.
PHỤ LỤC 11
Kết quả kiểm tra chất lƣợng 2 loạt kháng nguyên Vi PS sản xuất từ nồi lên men 7 lít bởi NIH (Mỹ)
Cách chuyển đơn vị hàm lƣợng O-acetyl từ % sang % (mol/mol) ra mmol/g: A mmol/g = % x 3,86/100
- Loạt 1: Hàm lƣợng O-acetyl = 36%
Hàm lƣợng O-acetyl (mmol/g) = 36 x 3,86/100 = 1,39. - Loạt 2: Hàm lƣợng O-acetyl = 69%
PHỤ LỤC 12
Kết quả kiểm tra chất lƣợng kháng nguyên Vi PS sản xuất ở nồi lên men 75 lít bởi FDA (Mỹ)
PHỤ LỤC 13
PHỤ LỤC 14
Kết quả kiểm định kháng nguyên Vi PS (Sanofi Aventis - Pháp)
Stt Lô Protein (mg/g) Nucleic acid (mg/g) O-acetyl (mmol/g) Kích thƣớc Vi (%) 1 FA081773 0,7 7,65 3,27 83,5 2 FA081774 0,67 8,27 3,23 83,0 3 105B 10 13,20 2,73 51,0 4 106B 10 14,00 2,50 66,6 5 107A1 10 2,70 2,32 69,3 Trung bình 10 7,94 ± 4,60 2,78 ± 0,43 69,58 ± 13,43 Tiêu chuẩn 10 20 > 2 > 50
PHỤ LỤC 15
PHỤ LỤC 16
PHỤ LỤC 17
Kết quả kiểm định vắc xin Thƣơng hàn Vi PS (Sanofi Aventis – Pháp) Stt Lô pH Phenol (mg/liều) Hàm lƣợng Vi (g/liều) O-acetyl (mol/liều) 1 D0114 6,87 1,03 27,1 0,080 2 E0210 6,86 1,07 23,9 0,092 3 E0285 7,01 1,04 21,2 0,094 4 G0268 6.90 1,04 23,0 0,082 5 H1347 7,24 1,00 26,0 0,086 6 H0472 6,90 1,07 25,0 0,084 7 J0070 7,02 1,10 26,0 0,082 8 J0272 6,97 1,10 25,0 0,075 9 J0285 7,00 1,10 22,5 0,087 10 J0455 6,96 1,10 25,5 0,066 11 N0081 6,78 1,06 24,6 0,077 12 M1279 6,88 1,14 20,6 0,081 13 X0249 6,82 1,02 26,0 0,084 14 W1472 6,92 1,04 24,4 0,081 Trung bình 6,94 ± 0,11 1,06 ± 0,04 24,20 ± 1,94 0,082 ± 0,007 Tiêu chuẩn 6,5 – 7,5 1,25 17,5 – 32,5 0,064 – 0,106
PHỤ LỤC 18
PHỤ LỤC 19
PHỤ LỤC 20
PHỤ LỤC 21
PHỤ LỤC 22
Sử dụng vắc xin Thƣơng hàn Vi PS trong Chƣơng trình Tiêm chủng Mở rộng Quốc gia
PHỤ LỤC 23
Giấy phép nhập khẩu Vắc xin Thƣơng hàn Vi PS (TYViVAC) vào Nigeria