Lấy chai giống vi khuẩn ra khỏi tủ ấm, lấy mẫu giống để kiểm tra thuần khiết. Đo đậm độ giống vi khuẩn. Giống cấp 2 đƣợc cấy vào 7 chai tam giác 3 lít (mỗi chai chứa 1000 ml canh thang TSB) để có OD lúc 0 giờ (To) = 0,6. Lắc chai giống 200 vòng/phút ở 37oC trong 4 - 5 giờ.
a. Khảo sát tỷ lệ giống
- Dựa trên kết quả nghiên cứu thử nghiệm ở nồi lên men 75 lít: Tỷ lệ giống là 4%. - Khảo sát nuôi cấy vi khuẩn với những tỷ lệ giống khác nhau (v/v): 3%, 4% và 5%. - Mỗi tỷ lệ giống nuôi cấy 3 mẻ với thể tích môi trƣờng cố định, cùng loại môi trƣờng, nhiệt độ nuôi cấy không đổi.
- Xác định độ đục (giá trị OD), đậm độ vi khuẩn, đánh giá hàm lƣợng kháng nguyên Vi PS và chọn tỷ lệ giống.
b. Khảo sát các thông số nuôi cấy * Khảo sát nhiệt độ nuôi cấy * Khảo sát nhiệt độ nuôi cấy
49
độ 37oC và nuôi cấy trong nồi lên men ở 32oC, khảo sát nhiệt độ nuôi cấy vi khuẩn Thƣơng hàn S. Typhi Ty2 ở nồi lên men 300 lít (Hình 2.1):
Bảng 2.3. Khảo sát nhiệt độ nuôi cấy Cách
Giai đoạn 1 2
Nhân giống 37oC 37oC
Lên men 32oC 37oC
- Xác định độ đục (giá trị OD), hàm lƣợng kháng nguyên Vi PS đông khô khi nuôi cấy ở nhiệt độ khác nhau.
- Chọn nhiệt độ nuôi cấy.
Hình 2.1. Hệ thống nồi lên men 300 lít (Chemap – Thụy Sĩ).
* Khảo sát oxy hòa tan
Mức độ oxy hòa tan khác nhau đƣợc duy trì trong quá trình nuôi cấy dựa vào 3 mức thông khí khác nhau:
50
Bảng 2.4. Khảo sát oxy hòa tan Mức
thông khí
Oxy hòa tan (%) Khuấy (vòng/phút) Tốc độ sục khí (lít/lít/phút) Áp suất khí (bar) 1 10 100 – 300 0,20 – 0,50 0,10 2 15 200 – 400 0,40 – 0,60 0,10 – 0,15 3 20 300 – 500 0,55 – 0,90 0,10 – 0,20
- Xác định độ đục (giá trị OD), hàm lƣợng kháng nguyên Vi PS đông khô khi nuôi cấy ở ở 3 mức thông khí khác nhau tƣơng ứng 3 mức oxy hòa tan.