CHƯƠNG 1 TỔNG QUAN TÀI LIỆU
1.4.1. Phương pháp vi sinh và hóa sinh
- Phân lập: Phương pháp phân lập là một trong các phương pháp cơ bản dùng để phát hiện vi khuẩn. Mẫu bệnh phẩm sau khi thu nhận được nuôi cấy trên môi trường chọn lọc riêng dành cho vi khuẩn E. ictaluri là EIM (Edwardsiella ictaluri medium). Vi khuẩn phát triển trên EIM được phân biệt với vi khuẩn E. ictaluri dựa trên hình thái và màu sắc của khuẩn lạc. EIM ức chế hầu hết các vi khuẩn Gram dương ngoại trừ cầu khuẩn Enterococci. Ngoài ra, fungizone cũng được thêm vào EIM nhằm ngăn chặn sự phát triển của hầu hết các loại nấm. EIM cho phép đánh giá nguồn môi trường, mức độ nhiễm và nguồn mang E. ictaluri. Cấy trải vi khuẩn trên môi trường EIM, nuôi cấy ở nhiệt độ 30oC sau 24-48 giờ thu được khuẩn lạc đơn có hình tròn nhỏ màu xanh và kích thước từ 0,5 – 1 mm [93].
- Xác định hoạt tính sinh hóa điển hình: Bên cạnh phương pháp vi sinh, các phản ứng sinh hóa đặc trưng của vi khuẩn E. ictaluri như: hoạt tính catalase (+), hoạt tính oxydase (-), khả năng sinh indol (-), sinh H2S (-), sinh axit trên các môi trường sucrose, monitol, arabinose cũng được dùng để xác định vi khuẩn E. ictaluri [82]. Vi khuẩn E. ictaluri có hoạt tính protease rất hạn chế, không phân hủy casein, gelatin, collagen nhưng lại phân hủy chrondroitin sulfate và gây tan huyết [108]. Để thực hiện
29
nhanh các phản ứng sinh hóa này, có thể sử dụng bộ kit (API-20E của hãng BioMerieux) được lưu hành trên thị trường để kiểm tra nhanh 20 chỉ tiêu sinh lý, sinh hóa. Dựa vào sản phẩm màu của cơ chất bị biến đổi so sánh với khóa phân loại vi khuẩn của Bergey để định tên vi khuẩn đến loài. Bộ kit API-20E như sau :
Hình 1.4. Bộ kit API-20E với các giếng phản ứng sinh hóa. (-) Các giếng cho phản ứng âm tính.
(+) Các giếng cho phản ứng dương tính
Việc xác định các đặc tính sinh hóa điển hình như khả năng đồng hóa một số loại đường, khả năng sinh các enzym chuyển hóa… đóng vai trò quan trọng để định loại vi sinh vật. Tuy nhiên, để áp dụng được phương pháp này thì vẫn cần phải phân lập và tinh sạch được vi sinh vật từ mẫu bệnh phẩm, sau đó làm giàu và nghiên cứu các đặc điểm sinh học của vi sinh vật nên tốn nhiều thời gian và độ tin cậy còn chưa cao, độ nhạy chưa đủ để xác định các tác nhân gây bệnh với nồng độ thấp [24].