Ei/1-Ei/8-Ei/10: dòng khuẩn lạc số 1-8-10 mang đoạn eip18 từ vi khuẩn E. ictaluri ATCC 13022; E5/3- E5/4: dòng khuẩn lạc số 3 và 4 mang đoạn eip18 từ vi khuẩn E. ictaluri E5; E40/3-E40/4: dòng khuẩn
lạc số 3 và 4 mang đoạn eip18 từ vi khuẩn E. ictaluri E40. ĐC: đối chứng, M: marker 1 kb
Chọn một số dòng khuẩn lạc E5/3, E5/4, E40/3, Ei/10 nuôi cấy và tách plasmid để kiểm tra sự có mặt của gen ngoại lai bằng phản ứng cắt bằng enzym KpnI và BglII. Do trên vector pJet 1.2 có 2 trình tự cắt bằng BglII tại 2 đầu đoạn gen được chèn vào và trên đoạn gen eip18 có 1 điểm nhận biết của enzym KpnI trong khi đó trên vector pJet 1.2 không có. Vì vậy, nếu sản phẩm PCR được gắn vào vector thì khi thực hiện phản ứng cắt bằng enzym BglII sẽ xuất hiện 2 băng, một băng có kích thước tương ứng với kích thước của vector pJet 1.2 (~3 kb) và một băng có kích thước tương ứng với sản phẩm PCR. Kết quả cho thấy các dòng tế bào E5/3, E5/4, E40/3, Ei/10 đều xuất hiện một băng tương ứng kích thước đoạn gen được chèn vào (~500 bp), trong khi đó đối chứng xuất hiện một băng hơn 1000 bp (1033 bp) (Hình 3.15A). Điều đó chứng tỏ vector tái tổ hợp đã mang gen ngoại lai.
Khi cắt mở vòng bằng enzym KpnI thì các dòng E5/3, E5/4, E40/3 và Ei/10 điều xuất hiện một băng chạy chậm hơn so với đối chứng là dòng tế bào E5/3 không bị cắt (Hình 3.15B). Từ kết quả trên có thể khẳng định đã thu được vector tách dòng pJet 1.2 mang gen eip18 phân lập từ vi khuẩn E. ictaluri ATCC 33202 và từ 2 mẫu vi khuẩn E5, E40 phân lập tại Việt Nam.
1000
500 250 250
Ei/1 Ei/8 Ei/10 E5/3 E5/4 E40/3 E40/4 ĐC E5/3 E5/4 E40/3 M Ei/10 ĐC bp
440bp
83
Hình 3.15. A - Kết quả điện di đồ sản phẩm cắt plasmid bằng enzym hạn chế BglII