M: marker protein màu; 1: kháng nguyên CD20; 2: Đối chứng âm
3.2.KẾT QUẢ GÂY MIỄN DỊCH GÀ BẰNG CD20 TẠO RA
CD20 có bản chất từ ngƣời do vậy gà đƣợc chọn để gây miễn dịch. Trong quá trình tiến hóa, các protein của động vật thƣờng có tính bảo thủ cao, do vậy khi sử dụng gà để gây miễn dịch sẽ có phản ứng đáp ứng miễn dịch mạnh hơn so với việc gây miễn dịch ở chuột hoặc ở thỏ. Hơn nữa, phân tử kháng thể của gà IgY có cấu trúc và tính chất giống với IgG ở ngƣời [92].
Trƣớc khi giết gà lấy tủy và lách để tách RNA, các mẫu huyết thanh gà sau khi gây miễn dịch lần thứ 3 và sau lần thứ 4 đƣợc kiểm tra đáp ứng miễn dịch bằng ELISA sau đó đo các dịch này ở bƣớc sóng 450-650 nm. Kết quả xác định đáp ứng miễn dịch của 3 con gà đã gây miễn dịch sau lần tiêm thứ 3 đƣợc trình bày ở Bảng 3.1 và đáp ứng miễn dịch của 3 con gà sau lần tiêm thứ 4 (trƣớc khi lấy tủy và lách để tách RNA) đƣợc thể hiện trên hình 3.9.
Bảng 3.1. Mức độ đáp ứng miễn dịch của gà bằng ELISA sau khi gây miễn dịch lần thứ 3
Huyết thanh gà pha loãng Gà thứ 1 Gà thứ 2 Gà thứ 3 Gà thứ 4 ĐC (-) 1/0 3,056 2,362 2,117 0,524 0,038 1/10 1,091 0,915 0,817 0,493 0,036 1/100 0,638 0,468 0,254 0,198 0,035 1/1000 0,192 0,213 0,091 0,087 0,039
Gà thứ 1, Gà thứ 2, Gà thứ 3: huyết thanh của 3 con gà đã gây miễn dịch lần thứ 3. Gà
thứ 4: huyết thanh gà không gây miễn dịch với kháng nguyên CD20. ĐC (-): không có huyết thanh gà.
65
Ba con gà có đáp ứng miễn dịch tốt đối với kháng nguyên CD20 và sau khi gây miễn dịch lần 4 đáp ứng miễn dịch cao hơn sau khi gây miễn dịch lần 3 (huyết thanh của 3 con gà pha loãng 1/100 sau khi gây miễn dịch lần 4 là 3,205; 2,613 và 2,207 cao hơn hẳn sau khi gây miễn dịch lần 3 là 0,638; 0,468 và 0,254). Tuy nhiên, mức độ đáp ứng miễn dịch của các cá thể gà là không giống nhau. Để thu nhận đƣợc sự đa dạng các đoạn gen mã hóa kháng thể đã gây miễn dịch ở gà, tủy xƣơng của 3 con gà đã gây miễn dịch với CD20 đƣợc lấy để tách chiết RNA tổng số và nhân bản gen mã hóa kháng thể scFv đặc hiệu kháng nguyên CD20.
3.3. THU NHẬN GEN MÃ HÓA scFv KHÁNG CD20 TỪ GÀ