- Khĩ đánh giá sự dung nạp
PHÂN LẬP, NUƠI CẤY VÀ TẠO TẤM TẾ BÀO SỪNG 2.3 Cơ sở khoa học
2.6.2. Đánh giá tính tồn vẹn tế bào sau nuơi cấy
Sự tồn vẹn của tế bào sau nuơi cấy được đánh giá bằng phương pháp nhiễm sắc thể đồ (Karyotype)
Nhiễm sắc thể đồ là xét nghiệm cơ bản trong đánh giá về mặt di truyền của tế bào. Nhiễm sắc thể đồ cho phép nghiên cứu bộ nhiễm sắc thể của một cá thể và cho phép phát hiện sự thay đổi di truyền, sự thay đổi này xảy ra ít nhất trên một băng, tương đương khoảng 103 đến 104 Kb.
Tế bào được ủ với Colcemid 0,2 µg/ml trong 20 phút để ngừng phân bào bằng cách ngăn sự hình thành của thoi vơ sắc
Tách rời các tế bào bằng trypsin/EDTA và ly tâm 1000 vịng/phút trong 10 phút
Bỏ dịch nổi, huyền phù cặn tế bào và ủ trong dung dịch nhược trương KCl 0,075M
Sau khi sốc nhược trương, tế bào được cố định nhanh chĩng trong dung dịch cố định (Met : axit acetic / 3 : 1). Sau lần cố định cuối cùng, quay ly tâm 1000 vịng/phút và cặn tế bào được huyền phù trong một thể tích dung dịch cố định phù hợp
Việc nhỏ lame được tiến hành với lame được làm lạnh và để khơ ngồi khơng khí
33 Xử lý với trypsin và nhuộm Giemsa được tiến hành như quy trình nhuộm dùng cho kỹ thuật nhuộm băng G: đầu tiên, lame được xử lý trong dung dịch trypsin 0,5% trong 1 phút và sau đĩ trong dung dịch nhuộm Giemsa 5% trong 5 phút. Tiếp theo đĩ, lame được rửa nhanh trong dung dịch đệm phosphate và để khơ ngồi khơng khí
Cuối cùng, lame được phân tích bằng vật kính dầu 100X kết nối với hệ thống phần mềm phân tích nhiễm sắc thể đồ cytovision.