- Khĩ đánh giá sự dung nạp
Màng collagen
3.5.3. Kết quả đánh giá yếu tố đánh dấu (marker) tế bào bằng RT-PCR
Sau khi tạo nhiều lớp trên màng collagen, các tấm tế bào được xác định bằng phương pháp RT-PCR với các yếu tố đánh dấu tế bào sừng. Kết quả điện di sản phẩm PCR trên gel agarose được chụp hình lại và trình bày trong Hình 2.15.
Hình 2.15. Kết quả RT-PCR các yếu tố đánh dấu của tế bào sừng
Hình 3.33. Kết quả thực hiện RT-PCR để xác định sự hiện diện của các tế
bào sừng. + M - Thang
+ 1, 3, 5, 7, 9 - Sản phẩm khuếch đại các gen tương ứng p63 (440bp), K14 (390bp), K5 (475bp), involucrin (373bp), -actin (587bp)
+ 2, 4, 6, 8, 10 - Sản phẩm khuếch đại gen của mẫu da bình thường đối chứng tương ứng p63, K14, K5, involucrin, -actin
BÀN LUẬN
p63 là một yếu tố đánh dấu của tế bào gốc biểu bì. p63 là một nhân tố phiên
mã thuộc họ gen p53. Tuy nhiên, khơng giống p53, p63 khơng phải là gen kìm
hãm khối u mà biểu hiện bình thường trong nhân của các tế bào sừng cĩ tiềm năng tăng sinh. p63 đĩng vai trị chủ yếu trong phát sinh hình thái bằng cách điều hịa sự phát triển và biệt hĩa biểu bì. p63 biểu hiện mạnh trong các holoclone (tế bào gốc), biểu hiện yếu trong các meroclone (các tế bào khuếch đại chuyển trẻ), khơng thể phát hiện trong các paraclone (tế bào khuếch đại chuyển).
K5, K14 đồng biểu hiện ở những tế bào gốc biểu bì chưa biệt hĩa, khơng biểu
hiện ở các nguyên bào sợi, tế bào langerhans, tế bào hắc sắc tố, tế bào nội mơ. Các protein này được xem là marker của các tế bào biểu mơ.
M 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
300bp 600bp 500bp 400bp
58 Involucrin là một yếu tố đánh dấu biệt hĩa của biểu mơ vảy sừng. Involucrin là một protein vỏ, là thành phần nổi bật của lớp ngồi cùng nhất của biểu bì. Involucrin khơng biểu hiện trong các tế bào biểu mơ lớp đáy.