CHƯƠNG 2 THỰC NGHIỆM VÀ CÁC PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
2.1. Hóa chất và thiết bị
2.1.1. Hóa chất
Hóa chất sử dụng trong nghiên cứu có độ tinh khiết lớn hơn 95% nên được dùng luôn mà không cần thêm bước tinh chế. Các hóa chất được sử dụng bao gồm:
• Gold (III) chloride trihydrate (HAuCl4) được sử dụng để tạo lớp hạt nano vàng (AuNPs) phân tán trên bề mặt điện cực mực in các bon (SPCE);
27
• p-Aminothiophenol (p-ATP): monome tạo poly(aminothiophenol) hoặc màng đơn lớp tự lắp ghép (SAM) trên điện cực AuNPs/SPCE;
• Cysteamine: tạo màng SAM trên điện cực AuNPs/SPCE;
• 1-Ethyl-3-(3-dimethylaminopropyl) carbodiimide (EDC) hydrochloride, N- hydroxysuccinimide (NHS): được sửdung để hoạt hóa nhóm -COOH của kháng thể Enrofloxacin (ENRO);
• 2-(N-morpholino) ethanesulfonic acid (MES): dung dịch đệm pha NHS và EDC;
• Protein phân tử nhỏ Sarcosine, 17β-estradiol và kháng sinh chloramphenicol (CAP), Ciprofloxacin (CF) và Norfloxacin (NOR);
• Kháng nguyên và kháng thểđơn dòng enrofloxacin (ENRO)
• Ethanolamin sử dụng thụđộng hóa các liên kết không đặc hiệu sau bước cốđịnh kháng thể lên bề mặt điện cực cảm biến;
• Enzyme Horseradish peroxidase (HRP);
• Dung dịch đệm muối photphat PBS 1X, 50% glycerol, pH=7,4: sử dụng pha kháng nguyên và kháng thể;
• KCl và cặp chất dò oxy hóa/khử K3Fe(CN)6 /K4Fe(CN)6: sử dụng đo phổ trở kháng phức;
• Ethanol, HCl và H2SO4: sử dụng làm sạch bề mặt điện cực;
• Dung dịch đệm phosphate-buffered saline (PBS) được pha từ các muối natri phosphate và natri clorua trong nước đề ion sao cho nồng độđạt 100 mM. Dung dịch PBS 100 mM sau khi pha được chuẩn độ pH dựa trên máy Hanna HI 8314 membrane pH-meter 0,00-14,00.
2.1.2. Vật tư, thiết bị
Bộ phận chuyển đổi tín hiệu của cảm biến trong nghiên cứu là điện cực mực in các bon (SPCE) của hãng BioDevice Technology, Nhật Bản. SPCE có cấu trúc gồm 3 điện cực được tích hợp trên đế nhựa: điện cực làm việc (mực in carbon), điện cực đối (mực in carbon), và điện cực chuẩn (mực in Ag/AgCl). Diện tích bề mặt của điện cực làm việc là 2,64 mm2. Thiết bị Ivium Vertex (Ivium Technologies B.V., Eindhoven, Hà Lan) được sử dụng để tạo hạt nano vàng (AuNPs) trên điện cực làm việc của SPCE cũngnhư thực hiện các phép đo phổ tổng trở (EIS).