- Môi trường bổ sun g2 (g/l):
3. BẢO QUẢN GIỐNG VI SINH VẬT
3.3. Phương pháp bảo quản giống trong cát
Nguyên tắc của phương pháp này là làm giảm độ ẩm của đất hoặc cát sau khi vô trùng. Độ ẩm thấp làm giảm khả năng hô hấp của vi sinh vật và như vậy sẽ bảo tồn được tính trạng mong muốn.
Phương pháp này thường dùng để giữ giống các vi sinh vật có bào tử. Cách làm như sau:
- Chuẩn bị cát: Cát sông đem rửa sạch bằng nước nhiều lần, sấy khô, sàng qua rây để bỏ các hạt lớn, ngâm trong HCl đậm đặc sau đó đem đun sơi 1 – 2 giờ, rửa nhiều lần cho đến khi cát trung tính (dùng phenolphtalein làm chỉ thị màu), có thể trung hịa bằng NaOH hoặc NaHCO3 nếu thấy cịn acid, sấy khơ ở 1200
C trong 3 – 4 giờ, chia cát khô vào các ống nghiệm và thanh trùng trong tủ sấy ở 160 – 1700
C trong 2 – 3 giờ, hoặc thanh trùng trong autoclave ở 1300C trong 90 phút. Trước khi sử dụng phải kiểm tra độ vô trùng bằng cách cho môi trường nước thịt - peptone vào cát đã vô trùng và để vào tủ ấm 28 – 300C trong khoảng 48 giờ đến 1 tuần. Quan sát hàng ngày, nếu môi trường vẫn trong nghĩa là cát đã vơ trùng, cịn nếu mơi trường bị đục thì phải đem cát thanh trùng lại.
- Chuẩn bị bào tử: Các chủng vi sinh vật đem nuôi trên mơi trường agar thích hợp để chúng tạo nhiều bào tử, thời gian thường đối với một số loài như sau: vi khuẩn 5 – 7 ngày trong 26 – 280C, nấm mốc 8 – 10 ngày trong 24 – 260C, xạ khuẩn 14 ngày trong 26 – 280C.
- Trộn bào tử vào cát: Bằng thao tác vô trùng cho 1 – 2 gram cát đã vô trùng vào các ống giống vi sinh vật đã hình thành bào tử, dùng que cấy vô trùng trộn đều bào tử với cát, tránh làm cát bị ướt quá vón cục, cho cát đã có bào tử vào ống nghiệm vô trùng, đậy nút bông và cho vào tủ sấy thường giữ dưới 400C hoặc tủ sấy chân khơng có các chất hút ẩm như CaCl2 hoặc silicagen trong khoảng 2 – 3 ngày cho đến khi thấy cát thật khơ, dùng paraffin đặc đun nóng chảy phết lên nút bơng để tránh trường hợp hút ẩm trở lại, bảo quản trong phòng mát, hoặc trong tủ lạnh 40C, thời gian bảo quản từ 1 đến nhiều năm, giống trước khi dùng cấy ria lên môi trường agar và chọn khuẩn lạc điển hình.