đều ngẫu nhiên thành 4 lô (3 thỏ cố định/lô) tương ứng với 4 loại thức ăn trong mỗi giai đoạn thí nghiệm kéo dài 14 ngày, gồm 7 ngày nuôi thích nghi, 7 ngày thu thập dữ liệu và lấy mẫu. Trong mỗi lô thí nghiệm, mỗi thỏ được nuôi trong lồng riêng biệt (92 x 61 x 42cm) cho phép xác định lượng thức ăn thu nhận và lượng phân thải ra theo cá thể. Sau mỗi giai đoạn thí nghiệm, thức ăn thí nghiệm được chuyển ngẫu nhiên sang ô vuông latin (lô) khác cho giai đoạn thí nghiệm tiếp theo sao cho mỗi thỏ đều được ăn tất cả các loại thức ăn thí nghiệm.
Bảng 3.1. Sơ đồ bố trí thí nghiệm trên các loại thức ăn xanh giàu xơ Thỏ Thỏ 1 Thỏ 2 Thỏ 3 Thỏ 4 Thỏ 5 Thỏ 6 Thỏ 7 Thỏ 8 Thỏ 9 Thỏ 10 Thỏ 11 Thỏ 12 GĐ1 PAR PAR PAR VOI VOI VOI SET SET SET THO THO THO
GĐ2 THO THO THO PAR PAR PAR VOI VOI VOI SET SET SET
GĐ3 SET SET SET THO THO THO PAR PAR PAR VOI VOI VOI
GĐ4 VOI VOI VOI SET SET SET THO THO THO PAR PAR PAR
* Ghi chú: GĐ - giai đoạn, PAR - cỏ lông para, SET - cỏ setaria, VOI - cỏ voi, THO - thóc.
e) Nuôi dưỡng và quản lý
Trước khi tiến hành thí nghiệm, thỏ được tiêm vắc xin phòng bệnh bại huyết và uống thuốc phòng bệnh cầu trùng. Thỏ được cho ăn tự do (ad libitum) thức ăn thí nghiệm với 3 lần cho ăn/ngày vào các thời điểm 8:00, 14:00 và 20:00h. Nước uống được cung cấp tự do suốt ngày đêm.
f) Phương pháp xác định các chỉ tiêu
- Phương pháp phân tích TPHH và giá trị dinh dưỡng trong thức ăn
Mẫu thức ăn cho ăn, mẫu thức ăn thừa và mẫu phân được phân tích chất khô (DM), chất hữu cơ (OM), protein thô (CP), xơ thô (CF), mỡ thô (EE) và tro (Ash) được phân tích theo các tiêu chuẩn tương ứng TCVN-4326-2001, TCVN- 4328-2007, TCVN-4329-2007, TCVN-4331-2001 và TCVN-4327-2007. Các thành phần xơ NDF và xơ ADF được xác định theo phương pháp của Van Soest
et al. (1991). Năng lượng trao đổi (ME) của thức ăn cho thỏ được ước lượng theo công thức của Lebas (2013):
ME = DE × (0,995 - 0,0048 × DP/DE) Trong đó:
DE (MJ/kg DM) = 15,627 + 0,000982CP² + 0,0040EE² - 0,0114Ash² - 0,169ADF ± 1,250
DP (%) = 64,734 + 0,646 CP + 2,17CF + 0,414NDF - 2,894ADF ± 9,338% * Ghi chú: CP - protein thô (% DM); EE - mỡ thô (% DM); Ash - Khoáng tổng số (% DM); CF - xơ thô (% DM); NDF - xơ trung tính (% DM); ADF - xơ axít (% DM).
- Phương pháp xác định tăng khối lượng hàng ngày
Thỏ được cân khối lượng vào đầu và cuối mỗi giai đoạn thí nghiệm (không kể thời gian nuôi thích nghi) vào lúc 7h sáng, trước lúc cho ăn. Tăng khối lượng bình quân hàng ngày (ADG) trong mỗi giai đoạn thu mẫu được tính theo công thức: ADG = (Khối lượng đầu kỳ - Khối lượng cuối kỳ)/số ngày nuôi. Đối với từng loại thức ăn, số liệu ADG là số liệu cá thể của những thỏ ăn thức ăn đó trong 4 giai đoạn thí nghiệm.
- Phương pháp xác định lượng thức ăn thu nhận: Thu nhận thức ăn cá thể được tính bằng chênh lệch giữa lượng cho ăn và lượng thừa hàng ngày (tính theo vật chất khô).
- Phương pháp xác định tỷ lệ tiêu hóa biểu kiến (gọi tắt tỷ lệ tiêu hóa) chất dinh dưỡng (tính theo DM)
Tỷ lệ tiêu hoá chất dinh dưỡng (Y, %) = 100*(A-B)/A, trong đó A và B tương ứng là lượng chất dinh dưỡng Y ăn vào và chất Y thải ra trong phân. Hệ số chuyển hoá thức ăn (FCR) được tính bằng tỷ lệ lượng các chất dinh dưỡng thu nhận/tăng KL.
- Phương pháp thu thập mẫu thức ăn và mẫu phân
Trong giai đoạn thu mẫu, thức ăn cho ăn được cân trước mỗi bữa ăn và thức ăn thừa được cân vào buổi sáng hàng ngày trước khi cho ăn bữa đầu tiên. Mẫu thức ăn cho ăn và mẫu thức ăn thừa được lấy mẫu theo từng cá thể (TCVN 4325:2007). Các mẫu được buộc chặt trong túi nilon và bảo quản trong tủ lạnh âm sâu -25oC. Cuối mỗi giai đoạn, các mẫu thức ăn cho ăn, mẫu thức ăn thừa được trộn đều theo lô và lấy mẫu đại diện, sấy khô, nghiền nhỏ qua mắt sàng 1mm (Cyclotec 1093 sample mill, Foss, Hillerød, Denmark) để phân tích thành phần hóa học. Tổng số mẫu phân tích cho mỗi loại thức ăn là 32 mẫu thức ăn (1 mẫu/lô x 4 lô x 4 giai đoạn x 2 đợt thí nghiệm) và 32 mẫu thức ăn thừa (1 mẫu/lô x 4 lô x 4 giai đoạn x 2 đợt thí nghiệm). Thành phần dinh dưỡng của thức ăn thu nhận được tính theo lượng thu nhận thực tế của từng cá thể.
Trong giai đoạn thu mẫu, toàn bộ phân thỏ được xác định liên tục trong 7 ngày cho từng cá thể. Tổng lượng phân hàng ngày được thu thập, buộc kín và được bảo quản ở nhiệt độ -25°C. Cuối mỗi giai đoạn, tất cả các mẫu phân được cân gộp tương ứng với mỗi thỏ riêng biệt, lấy mẫu đại diện 10% để gửi đi phân tích. Tổng số mẫu phân phân tích là 96 mẫu phân (3 mẫu/lô x 4 lô x 4 giai đoạn x 2 đợt thí nghiệm).
g) Phương pháp xử lý số liệu
Số liệu thí nghiệm được phân tích phương sai (ANOVA) đối với thí nghiệm ô vuông latin phức tạp 3, 4 x 4 bằng thủ tục GLM của phần mềm Minitab 16. So sánh cặp đôi các giá trị trung bình theo phương pháp Tukey ở mức P<0,05. Các biến độc lập gồm: loại thức ăn và giai đoạn thí nghiệm, cá thể thỏ thí nghiệm; các biến phụ thuộc gồm: lượng dinh dưỡng thu nhận, tỷ lệ tiêu hóa, tăng khối lượng bình quân (ADG) và hệ số chuyển hóa thức ăn (FCR). Mô hình thống kê như sau:
Yjjkl = µ + Oi + Ti + Gj + Ck + eijkl
Trong đó:
µ: Giá trị trung bình (ADG, FCR);
Oi : ảnh hưởng của ô vuông thứ i (i= 1 đến 3); Tj : ảnh hưởng của thức ăn thứ j (j = 1 đến 4);
Gj: ảnh hưởng của giai đoạn thí nghiệm thứ j (j = 1 đến 4);
Ck (Oi): ảnh hưởng của cá thể k (k = 1 đến 4) trong ô vuông i (i = 1 đến 3); eijkl: sai số ngẫu nhiên.
3.4.2.2. Thí nghiệm 2: Xác định thành phần hóa học và tỷ lệ tiêu hóa của thức ăn thô xanh giàu protein
a) Gia súc thí nghiệm
Tổng số 24 thỏ đực New Zealand 8 tuần tuổi (1,53 ± 0,13kg) được dùng trong hai đợt thí nghiệm (mỗi đợt 12 con).
b) Thức ăn thí nghiệm
Chè đại (Trichanthera gigantea), rau muống (Ipomoea aquatica), rau lang (Ipomoea batatas) và thức ăn hỗn hợp. Chè đại được thu cắt lúc 45 - 60 ngày tái sinh, rau muống và rau lang thu cắt lúc 35 - 45 ngày tuổi. Thức ăn thô xanh được chặt ngắn 15 - 20cm và phơi tái trước khi cho ăn. Để đảm bảo lượng thu cắt mỗi ngày khoảng 4 - 5kg cho mỗi loại thức ăn xanh đúng tuổi thu cắt, các loại cỏ được trồng trong 4 ô/giống cỏ (mỗi ô 40 - 45m2), các ô được trồng cách nhau 15 ngày. Quy trình trồng và chăm sóc các giống cỏ được trình bày tại phụ lục 3.
c) Thiết kế thí nghiệm
Thí nghiệm được thiết kế tương tự như thí nghiệm 1 (bảng 3.2).