Các chồi in vitro được cắt thành các đốt dài khoảng 1,0 - 1,5 cm. Mỗi đốt được cấy lên môi trường cơ bản MS có bổ sung riêng lẻ hay tổ hợp BAP, Kin và IBA để thăm dò khả năng nhân chồi.
Ảnh hưởng của BAP lên khả năng nhân chồi
Kết quả nghiên cứu ảnh hưởng của BAP (0,5 - 3,0 mg/l) lên khả năng nhân chồi in
vitro của cây hồ tiêu sau 8 tuần nuôi cấy được trình bày ở bảng 2.51.
Bảng 2.51. Ảnh hưởng của BAP lên khả năng nhân chồi cây hồ tiêu BAP (mg/l) Số lượng chồi (chồi/mẫu) Chiều cao chồi (cm)
0,0 1,00c 0,95c 0,5 1,08c 1,06bc 1,0 1,23c 1,29abc 1,5 1,46bc 1,31abc 2,0 2,21b 1,36ab 2,5 3,08a 1,45ab 3,0 2,17b 1,59a
Ghi chú: Các chữ cái khác nhau trong cùng cột thể hiện sai khác có ý nghĩa với p< 0,05
Từ kết quả ở bảng 2.51 cho thấy, ở môi trường đối chứng không bổ sung chất KTST hệ số nhân chồi thấp, chỉ đạt 1,00chồi/mẫu. Khi bổ sung BAP nồng độ từ 0,5 - 2,5 mg/l, khả năng tạo chồi tỷ lệ thuận với nồng độ BAP. Trong đó, môi trường bổ sung 2,5 mg/l BAP cho số lượng chồi lớn nhất (3,08 chồi/mẫu) với chiều cao chồi đạt 1,45 cm. Quan sát hình thái cho thấy chồi có màu xanh, to, có khuynh hướng gia tăng về chiều cao và xuất hiện các chồi con mọc ra từ nách lá chồi lớn.
Tiếp tục tăng nồng độ BAP lên 3,0 mg/l, số lượng chồi tạo thành giảm (từ 3,08 chồi/mẫu xuống còn 2,17 chồi/mẫu), tuy nhiên chiều cao chồi lại tăng, đạt cao nhất (1,59 cm) ở nồng độ BAP 3,0 mg/l.
Như vậy, môi trường bổ sung 2,5 mg/l BAP cho hệ số nhân chồi cao nhất đạt 3,08 chồi/mẫu. Còn chiều cao chồi tốt nhất (1,59 cm) trên môi trường bổ sung 3,0 mg/l BAP.
Ảnh hưởng của KIN đến khả năng nhân chồi
Kết quả nghiên cứu ảnh hưởng của KIN (0,5 - 3,0 mg/l) lên khả năng nhân chồi sau 8 tuần nuôi cấy được trình bày ở bảng 2.52
Bảng 2.52. Ảnh hưởng của Kin đến khả năng nhân chồi cây hồ tiêu
Kin (mg/l) Số lượng chồi (chồi/mẫu) Chiều cao chồi (cm)
0,0 1,00c 0,95c 0,5 1,15c 1,04bc 1,0 1,20c 1,18abc 1,5 1,4bc 1,26abc 2,0 2,1ab 1,28abc 2,5 2,52a 1,37ab 3,0 2,96a 1,47a
Qua kết quả trình bày ở bảng 2.52 cho thấy, môi trường có nồng độ 3,0 mg/l Kin có ảnh hưởng tốt nhất đến khả năng nhân chồi. Số chồi đạt được là 2,96 chồi/mẫu, chiều cao chồi đạt 1,47 cm. Chồi sinh trưởng và phát triển bình thường. Tuy nhiên, các chồi hình thành trên môi trường bổ sung Kin có số lượng chồi và chiều cao của chồi thấp hơn trên môi trường bổ sung BAP .
Ảnh hưởng của tổ hợp BAP và IBA lên khả năng nhân chồi
Các kết quả đã trình bày ở bảng 2.51 cho thấy, khi môi trường nuôi cấy chỉ bổ sung riêng lẻ BAP thì sự ảnh hưởng của nó lên khả năng nhân chồi chưa cao (3,08 chồi/mẫu). Do đó, chúng tôi tiến hành nghiên cứu ảnh hưởng của tổ hợp BAP (0,5 - 3,0 mg/l) và IBA 0,5 mg/l trong môi trường nuôi cấy lên khả năng nhân chồi. Kết quả sau 8 tuần nuôi cấy được thể hiện ở bảng 2.53
Dựa vào kết quả ở bảng 2.53 chúng tôi nhận thấy, môi trường có bổ sung 2,5 mg/l BAP kết hợp với 0,5 mg/l IBA là tốt nhất cho nhân chồi. Số chồi trung bình hình thành đạt cao nhất 5,17 chồi/mẫu, chiều cao trung bình chồi cao nhất đạt 1,51 cm. Chồi sinh trưởng và phát triển tốt.
Bảng 2.53.Ảnh hưởng của tổ hợp BAP và 0,5 mg/l IBA lên khả năng nhân chồi cây hồ tiêu CKTST (mg/l) BAP IBA 0,0 0,0 1,00e 0,95d 0,5 0,5 2,29d 1,04cd 1,0 0,5 2,63d 1,16cd 1,5 0,5 3,58c 1,26abc 2,0 0,5 3,92bc 1,42ab 2,5 0,5 5,17a 1,51a 3,0 0,5 4,25b 1,32ab
Ghi chú: Các chữ cái khác nhau trong cùng cột thể hiện sai khác có ý nghĩa với p< 0,05
Từ kết quả ở bảng 2.51 và 2.53 cho thấy, tổ hợp BAP và IBA làm cải thiện số lượng chồi hơn hẳn so với môi trường chỉ bổ sung BAP. Ở môi trường có 2,5 mg/l BAP, số lượng chồi trung bình là 3,08 chồi/mẫu. Trong khi đó, ở môi trường có 2,5 mg/l BAP kết hợp với 0,5 mg/l IBA, số lượng chồi trung bình là 5,17 chồi/mẫu mặc dù chồi có kích thước nhỏ hơn. Ở tất cả các nghiệm thức, chồi có hình thái bình thường, có thể phát triển thành cây con in
vitro hoàn chỉnh hoặc làm nguyên liệu nhân chồi tiếp theo. Bên cạnh đó, chúng tôi cũng nhận
thấy rằng, việc bổ sung BAP riêng lẻ hay BAP kết hợp IBA đều dẫn đến sự hình thành callus ở các gốc cấy.
Nghiên cứu của Đoàn Thị Ái Thuyền và cs. (2005) cho thấy, môi trường có bổ sung 2,0 mg/l BAP và 0,5 mg/l IBA là thích hợp nhất cho việc hình thành chồi từ đốt cây hồ tiêu (Piper nigrum L.). Sau 3 - 4 tuần bắt đầu xuất hiện chồi mới. Số chồi hình thành từ 4 - 6 chồi/mẫu. Kết quả nghiên cứu của chúng tôi cho thấy, môi trường 2,5 mg/l BAP và 0,5 mg/l IBA là thích hợp nhất với số lượng chồi đạt 5,17 chồi/mẫu.