Chúng tôi cảm ứng chủng E.coli BL21 (DE3) tái tổ hợp với các nồng độ IPTG 0
mM, 0,25 mM, 0,5 mM, 1 mM trong 6 giờ, ở nhiệt độ tối ưu cho từng hệ vector nhằm xác định nồng độ IPTG cảm ứng tốt nhất cho từng hệ vector. Phổ nồng độ IPTG được chọn dựa trên công trình của Swalley và cộng sự (2006), trong khoảng từ 0,1 mM đến 1,0 mM.
A
D C
44
Nồng độ IPTG tối ưu là nồng độ thấp nhất mà vẫn đảm bảo lượng protein p16INK4A tái tổ
hợp biểu hiện ở thể tan cao nhất so với các protein khác trong dịch ly giải tế bào.
Dựa vào kết quả điện di SDS-PAGE (hình 19) và phân tích bằng phần mềm Total Lab Quant (bảng 12) chúng tôi nhận thấy: mức độ biểu hiện protein mục tiêu đạt giá trị cao nhất khi nồng độ IPTG cảm ứng là 0,25 mM đốivới vector pSUMO-p16, 0,5 mM đối với các vector pETM-p16, pET-p16 và 1mM đối với vector pGAT-p16.
Hình19. Kết quả SDS-PAGE từ dịch protein thu nhận với các vector pET-p16 (A), pETM-p16 (B), pSUMO-p16 (C), pGAT-p16 (D) ở các nồng độ IPTG khác nhau.Giếng 1: Thang phân tử
lượng protein;giếng 2, 4,6,8: Protein ở thể vùi từ chủng BL21 tái tổ hợp được cảm ứng ở các nồng độ IPTG 0mM, 0,25mM, 0,5 mM, 1,0mM;giếng 3,5,7,9: Protein ở thể tan từ chủng BL21 tái
tổ hợp được cảm ứng ở các nồng độ IPTG 0mM, 0,25mM, 0,5mM, 1,0mM.
Bảng12. Kết quả phân tích bằng phần mềm Total Lab Quant mức độ biểu hiện protein pha tan với protein khác của tế bào trong các hệ vector ở các nồng độ IPTG khác nhau.
Như vậy, nồng độ IPTG cảm ứng tối ưu với các pSUMO-p16 là 0,25 mM, pET- p16, pETM-p16, là 0,5mM, còn đối với vector pGAT-p16 là 1 mM.