Kết quả điện di SDS-PAGE (hình 13 A1,2,3,4) cho thấy ở chủng BL21 mang các vector tái tổ hợp được cảm ứng (giếng 5) có sự xuất hiện với mức biểu hiện vượt trội của một protein không thấy ở các mẫu mang vector không tái tổ hợp hoặc mang vector tái tổ hợp nhưng không được cảm ứng.
Các protein mục tiêu có kích thước lớn hơn dự đoán đối với protein E7 HPV 16 biểu hiện ở dạng dung hợp với các đuôi khác nhau theo tính tốn lý thuyết (bảng 7).
Bảng 7. Phân tử lượng dự đốn của protein E7 HPV16 dung hợp với các đi khác nhau.
Hệ vector Dạng dung hợp của protein
E7 HPV16
Kích thước dự đốn
Kích thước trên gel polyacrylamide 12%
pET-28a(+) 6xHis-E7 14 kDa 20 kDa
pETM-44 6xHis-protein MBP-E7 51 kDa 57 kDa
pE-SUMO3 6xHis- protein SUMO –E7 30 kDa 36 kDa
37 A1 B1 A2 B2 A3 B3 B4 A4
Hình 13. Kết quả SDS-PAGE (A ) và Western blot (B) từ các vector pET-E7 (1), pETM-E7 (2), pSUMO-E7 (3), pGAT-E7 (4). Giếng 1: Thang phân tử lượng protein. Giếng 2,3: Protein tổng
của E.coli BL21 (DE3) mang các vector nguyên thủy không được và được cảm ứng.Giếng 4,5: Protein tổng từ E.coli BL21 (DE3) mang các vector tái tổ hợp không được và được cảm ứng: Giếng 6,7: phân đoạn protein thể vùi và thể tan từ chủng BL21mang các vector tái tổ hợp được
cảm ứng.
Sự khác biệt này đã được Moro và cộng sự (1996) ghi nhận. Cơng trình này cho thấy sự di chuyển của một polypeptide trong gel polyacrylamide phụ thuộc vào tương tác giữa nó với các phân tử SDS. Sự hiện diện của các amino acid giàu điện tích âm trong chuỗi polypetide sẽ cản trở tương tác này. Đặc biệt, sự hiện diện của hai amino acid tích điện âm, glutamic acid hay aspartic acid, liền kề nhau sẽ hạn chế sự liên kết giữa SDS và chuỗi polypeptide khiến chuỗi polypeptide di chuyển chậm trong gel. Protein E7 HPV 16 có thành phần glutamic và aspartic acid lần lượt là 9,18 % và 10,2 % và có một vùng, từ amino acid thứ 33 đến amino acid thứ 37, giàu glutamic và aspartic acid. Mặt khác, protein E7 HPV16 cịn có proline với tỉ lệ 6,12 % có khả năng tăng tính bền của cấu trúc protein khiến cho protein càng khó hình thành phức hợp với phân tử SDS.
Kết quả Western blot (hình 13 B1,2,3,4) với kháng thể đặc hiệu cho protein E7 HPV16 cho thấy có vạch tín hiệu lai tương ứng với kết quả điện di SDS-PAGE.
38