- So sánh về mức độ tương đồng về ADN giữa chủng Hib từ bệnh nhi VMN và chủng Hib từ trẻ khỏe mạnh dưới 5 tuổ
CCCGGG G G G C C C
4.5.2. Đỏnh giá đặc điểm gen mã hóa enzym β-lactamase của những chủng Hib phõn lập được
Enzym β-lactamase, trung gian đề kháng ampicillin ở vi khuẩn Hi lần đầu tiên được xác định vào đầu năm 1970 và β-lactamase loại TEM được xác định vào năm 1975. Năm 1981, Rubin và cộng sự đã báo cáo sự xuất hiện loại β-lactamase mới, sau đó được gọi là ROB-1. Cả hai loại này đều thuộc lớp β- lactamase A nằm trên plasmid có vai trò trong đề kháng ampicillin và bị ức chế có hiệu quả bởi những chất ức chế β-lactamase, như clavulanate hay sulbactum. Chủng Hi kháng ampicillin do β-lactamase dễ dàng được phát hiện trên lâm sàng, đó là những chủng dương tính với một trong hai loại enzym, cho kết quả MIC90 ≥ 32àg/ml đối với ampicillin và cả hai dương tính với phản ứng ly giải nitrocefin. Trên thực tế, có thể sử dụng phương pháp sinh học phân tử để xác định sự xuất hiện một trong hai enzym β-lactamase của chủng Hi phân lập được (TEM-1 và ROB-1), PCR là phương pháp thường được sử dụng nhất hiện nay. Một số nghiên cứu đã phân biệt những chủng Hi có enzym β-lactamase bằng cách phân loại enzym. Trong đó, gen TEM của
Hi có được do sự hoán chuyển trên transposon (Tn): Tn2 và Tn3 từ những vi
khuẩn họ đường ruột (Enterobacteriaceae) lên plasmid "bí ẩn" (cryptic plasmid) đã thấy xuất hiện ở những loài thuộc giống Haemophilus. Đối với gen ROB, lần đầu tiên được mô tả vào năm 1981 với một chủng Hib phân lập
trờn lõm sàng ở bệnh nhân VMN. Gen ROB của Hi thuộc loại ROB-1 và nằm trên một plasmid nhỏ khoảng 4,1-5,0 kb (kilobase). Hầu hết những nghiên cứu cho thấy gen TEM quy định tổng hợp enzym β-lactamase của Hi thuộc loại TEM-1. Farrell và cộng sự đã cho thấy tỷ lệ 93,7% TEM-1 và 4,6% ROB-1 trong một điều tra toàn cầu với trên 2000 chủng Hi có β-lactamase dương tính, tương tự như những nghiên cứu trước đõy. Tỷ lệ ROB-1 trong số những chủng Hi có enzym β-lactamase dương tính khác nhau rất nhiều tùy theo vị trí địa lý, với tỷ lệ cao nhất được tìm thấy ở Mexico (30%), tiếp theo ở
Mỹ (13,2%) và Canada (4,9%). Những chủng Hi có cả 2 enzym rất hiếm có, duy nhất một trường hợp được báo cáo ở nghiên cứu của Farrell [109].
Nghiên cứu này của chúng tôi cho thấy tỷ lệ gen quy định enzym β- lactamase của Hib phõn lập được không có sự biệt giữa những chủng Hib gõy VMN và chủng Hib phõn lập được từ trẻ khỏe mạnh dưới 5 tuổi. Trong đó, hầu hết gen quy định tổng hợp enzym β-lactamase của các chủng Hib là TEM-1 (98,0% đối với Hib gõy bệnh và 95,8% đối với chủng phõn lập từ trẻ khỏe mạnh) và tỷ lệ rất thấp là ROB-1 (2,0% đối với Hib gõy bệnh và 4,2% đối với chủng phõn lập từ trẻ khỏe mạnh). Kết quả này cũng phù hợp với nhiều nghiên cứu về vi khuẩn Hi nói chung và Hib nói riêng. Bên cạnh đó, nghiên cứu của Karlowsky và cộng sự đối với 324 chủng Hi có β-lactamase dương tớnh từ những bệnh nhõn nhiễm trùng đường hô hấp dưới, cho thấy 90,7% chủng Hi có gen TEM-1 và 9,3% gen ROB-1. Tương tự, nghiên cứu của Cerquetti cũng đã cho kết quả những chủng Hi gõy bệnh xõm hại có khả năng sinh enzym β-lactamase với 100% gen mã hóa enzym này thuộc loại TEM-1 [28], [54]. Ngoài ra, một nghiên cứu khác của Dabernat và cộng sự về đặc điểm những chủng Hi phõn lập được từ trẻ khỏe mạnh được nuôi dưỡng tại các trung tõm chăm sóc ban ngày ở Pháp cho thấy 100% gen mã hóa enzym β-lactamase thuộc loại TEM-1 [30]. Vì vậy, có thể nói TEM-1 là gen mã hoá enzym β-lactamase chiếm tỷ lệ hầu hết trong số những vi khuẩn Hi
phõn lập được, ngược lại gen ROB-1 chiếm tỷ lệ rất thấp và phụ thuộc vào vị trí địa lý từng vùng, từng quốc gia [109].
