p là tỷ lệ trẻ khỏe mạnh tại các Nhà trẻ-Mẫu giáo có mang vi khuẩn
2.2.2. Nội dung các bước nghiên cứu
2.2.2.1. Đối với những chủng Hib phân lập từ trẻ bệnh:
Toàn bộ 102 chủng Hib gõy bệnh VMN được phõn tích theo các bước sau đõy:
- Xác định biotype, khả năng sinh enzym β-lactamase, gen mã hóa tổng hợp enzym β-lactamase.
- Xác định mức độ nhạy cảm với một số kháng sinh thông dụng (MIC) theo phương pháp E-test.
- Phõn tích cấu trúc ADN của Hib dựa trên phương pháp PFGE để xác định phõn loại genotype.
2.2.2.2. Đối với các chủng Hib phân lập từ nhóm trẻ khoẻ mạnh: được tiến
hành theo các bước sau đõy:
- Phõn lập Hib từ trẻ khỏe mạnh dưới 5 tuổi:
+ 212 mẫu bệnh phẩm (tăm bụng) ngoỏy họng của 212 trẻ dưới 5 tuổi ở 04 nhà trẻ (tại Hải Dương 02 nhà trẻ (01 ở nông thôn, 01 ở thành phố) và Hà Tây (nay thuộc Hà Nội) 02 nhà trẻ (01 ở nông thôn, 01 ở thành phố)) được giữ trong những ống nghiệm vô khuẩn chứa 01ml canh thang BHI ở nhiệt độ phòng và vận chuyển trong 4 giờ về phòng Thí nghiệm.
+ Nuôi cấy, phõn lập và xác định Hib tại phòng "Phòng vi khuẩn hô
hấp" - Viện Vệ Sinh Dịch Tễ Trung Ương.
- Xác định biotype, khả năng sinh enzym β-lactamase, gen mã hóa tổng hợp enzym β-lactamase.
- Xác định mức độ nhạy cảm với một số kháng sinh thông dụng theo phương pháp khoanh giấy khuếch tán (Kirby – Bauer).
- Phõn tích cấu trúc ADN của Hib dựa trên phương pháp PFGE để xác định phõn loại genotype (52 chủng).
2.2.2.3. So sánh đặc điểm sinh học phõn tử, xác định mối liên quan giữa những chủng Hib phõn lập từ bệnh nhi VMN và trẻ khỏe mạnh dưới 5 tuổi
- Xác định mối tương quan giữa đặc điểm phõn loại biotype, genotype, khả năng sinh enzym β-lactamase, gen quy định enzym β-lactamase, mức độ nhạy cảm với kháng sinh giữa những chủng Hib phân lập từ bệnh nhi viêm màng não và trẻ khỏe mạnh.
- So sánh đặc điểm sinh học, sinh học phõn tử giữa những chủng Hib phân lập từ bệnh nhi viêm màng não và trẻ khỏe mạnh.
