p là tỷ lệ trẻ khỏe mạnh tại các Nhà trẻ-Mẫu giáo có mang vi khuẩn
2.3. Vật liệu và các kỹ thuật sử dụng trong nghiên cứu
2.3.1. Vật liệu
2.3.1.1. Sinh phẩm, hoá chất, dụng cụ dùng trong kỹ thuật phân lập xác định biotype vi khuẩn Hib
- Môi trường chocolate, khoanh giấy X, V và XV (Hóng Bio-rad) - Bộ KIT thử tính chất sinh vật hoá học Api10s (Hóng bio Mộrieux). - Huyết thanh mẫu chẩn đoán typ huyết thanh Hib (Hóng Bio-rad) - Dung dịch NaCl 90/00 vô trùng, pipett vô trùng, ống độ đục chuẩn Mc- farland và các dụng cụ vô trùng khác.
2.3.1.2. Sinh phẩm, dụng cụ, hóa chất dùng xác định khả năng sinh enzym β- lactamase của các chủng Hib và mức độ nhạy cảm với một số kháng sinh thông dụng
- Sử dụng các khoanh giấy thử cefinase của Hãng Becton Dickinson. - Que cấy, nước muối vô trùng, lam kớnh.
- Nước muối sinh lý vô trùng (NaCl 0,9%) - Ống độ đục chuẩn Mc – Farland.
- Thanh E-test của các loại kháng sinh:
Ampicillin, Ampicillin/sulbactum, Cefaclor, Cefotaxim, Ceftriaxon, Chloramphenicol, Erythromycin, Clarithromycin, Azithromycin, Rifampicin(*)
(Hóng AB Bio-Disk, Sweeden).
- Khoanh giấy kháng sinh, với các loại kháng sinh tương tự trên(*)
(Hóng Bio-rad, France).
2.3.1.3. Sinh phẩm, hoá chất, dụng cụ máy móc dùng trong kỹ thuật PCR
Sinh phẩm
Các loại sinh phẩm dùng trong PCR gồm các loại như: [6],[54] - Cặp mồi để chẩn đoán gen TEM:
5' TGG GTG CAC GAG TGG GTT AC 3' và 5' TTA TCC GCC TCC ATC CAG TC 3'
- Cặp mồi để chẩn đoán gen ROB:
5' ATC AGC CAC ACA AGC CAC CT 3' và 5' GTT TGC GAT TTG GTA TGC GA 3'
- Đệm, nước khử ion.
- Enzym Taq ADN Polymerase 2.5U. - dNTPs gồm : ATP, TTP, GTP, CTP. - Thang ADN mẫu dùng trong diện di gen. - MgCl2 25mM, KCl 50mM
Hoá chất
Hoá chất dùng trong PCR bao gồm các loại sau : - Thạch Agarose dùng trong điện di gen.
- Ethidium bromide dùng để nhuộm gen.
Dụng cụ, máy móc phục vụ kỹ thuật PCR
- Máy li tâm lạnh.
- Máy điều nhiệt tự động (Thermal Cycler - Ependorff, Germany) - Bộ điện di ngang.
- Máy chụp ảnh gel và phim Kodak cỡ 667.
2.2.1.4. Sinh phẩm, hoá chất, dụng cụ, máy móc dùng trong PFGE
Sinh phẩm
- Dùng trong nuôi cấy vi khuẩn Hib để gặt khuẩn lạc: + Môi trường chocolate.
+ Môi trường canh thang (Tryticase soy có 5% Fildes). - Dùng trong qui trình PFGE :
+ Enzym SmaI (Toyob Co. Ltd., Osaka, Japan). + Lysozyme, Proteinase K
+ Dung dịch ly giải vi khuẩn và một số sinh phẩm khác.
Hoá chất
- Thạch Incert Agarose dùng để tạo các plug vi khuẩn. - Thạch Gold agarose dùng cho điện di các đoạn ADN. - Ethidium Bromide dùng để nhuộm các đoạn ADN. - Dung dịch EDTA.
- Dung dịch Pett IV. - Dung dịch ES.
- Dung dịch Tris-HCl 1M. - Dung dịch BSA 0,1%.
- Tris HCl, Pett IV, PMSF (Phenylmethylsulfonylfloride), lauryl sarcosine và một số hóa chất khác.
Dụng cụ, máy móc phục vụ cho kỹ thuật PFGE
- Máy ảnh chụp gel và phim Kodak cỡ 667 và các dụng cụ khác.