Chương 1 TỔNG QUAN TÀI LIỆU
1.2. Các phương pháp chẩn đoán nhiễm nấm Cryptococcus neoformans
1.2.2. Chẩn đoán miễn dịch học phát hiện kháng nguyên
Sử dụng kháng thể để phát hiện kháng nguyên vỏ polysaccharide của nấm trong dịch não tủy được coi là xét nghiệm nhanh có giá trị nhất trong chẩn đốn nấm tại phịng xét nghiệm. Việc phát hiện kháng nguyên cryptococcus (CrAg) trong dịch não tủy, huyết thanh hoặc huyết tương đã trở thành một cơng cụ chẩn đốn thiết yếu để chẩn đoán viêm màng não do C. neoformans hoặc bất kỳ triệu chứng thần kinh trung ương (CNS)
[38]. Có rất nhiều phương pháp xét nghiệm để phát hiện CrAg đã được xây dựng và thương mại hóa trên thị trường như các bộ sinh phẩm ELISA, ngưng kết latex. Gần đây sự phát triển của các test miễn dịch dòng chảy CrAg (như LFA; Immy Inc., Norman, OK...) đã tạo ra một cuộc cách mạng trong chẩn đoán viêm màng não do Cryptococcus.
Độ nhạy của phương pháp này là cao nhất khi xét nghiệm trên mẫu dịch não tủy, đặc biệt là mẫu dịch não tủy của các bệnh nhân nhiễm HIV. Hầu hết các bệnh nhân HIV có nhiễm C. neoformans đều có phản ứng
dương tính khi xét nghiệm miễn dịch bằng dịch não tủy [38]. Tuy nhiên tỷ lệ này chỉ đạt 60% ở các bệnh nhân nhiễm nẫm khơng có HIV.
Những phương pháp xét nghiệm miễn dịch học thơng thường có: Thử nghiệm đông kết latex (Latex agglutination assay - LAT); thử nghiệm miễn dịch enzym (enzym immunoassay – IEA), thử nghiệm miễn dịch dòng chảy (Lateral Flow Assay - LFA).
1.2.2.1. Thử nghiệm ngưng kết latex (LAT)
LAT là thử nghiệm miễn dịch thông dụng nhất để xác định C. neoformans. Đây là một xét nghiệm nhanh, dễ tiến hành, có thể phát hiện
được tất cả các dạng miễn dịch khác nhau. Một số bộ sinh phẩm đã được thương mại hóa trên thị trường có độ nhạy từ 90-100% và độ đặc hiệu 97- 100% so với phương pháp ni cấy và chẩn đốn lâm sàng. Ngưỡng phát hiện
của hầu hết các bộ sinh phẩm đã được thương mại là khoảng 10 ng polysaccharide/mL. Phương pháp này có tỷ lệ dương tính giả khoảng 2-5%; và có tỷ lệ âm tính giả khá cao đối với các trường hợp có tỷ lệ nhiễm thấp hoặc nhiễm phối hợp nhiều loại nấm khác nhau [40].
1.2.2.2. Thử nghiệm miễn dịch enzym (EIA)
Thử nghiệm theo phương pháp này đắt hơn LAT, yêu cầu có máy đọc, tuy nhiên độ nhạy và độ đặc hiệu cao hơn so với LAT, có thể phát hiện nhiễm nấm ở giai đoạn sớm hơn. Độ nhạy của EIA so với LAT ở các chủng serum dạng A và B có thể lên tới 12 lần, và tương đương ở các chủng serum dạng C và D. Độ tương đồng giữa 2 phương pháp này khoảng 92-98%. Cũng tương tự như LAT, EIA cũng có tỷ lệ dương tính giả nhất định.
1.2.2.3. Thử nghiệm miễn dịch dòng chảy (LFA)
LFA xuất hiện trong vòng 5 năm trở lại đây và được coi là một cuộc cách mạng cho chẩn đoán nấm. Khơng giống như LAT và EIA có sinh phẩm của thử nghiệm: LFA ổn định ở nhiệt độ môi trường, không cần bảo quản lạnh, khơng cần các hóa chất, trang thiết bị đắt tiền, thời gian thực hiện phản ứng nhanh trong vịng 15 phút là có kết quả. CrAg LFA cũng có độ nhạy cao hơn so với LAT và EIA và độ đặc hiệu cao hơn ở những trường hợp nồng độ kháng thể thấp. Thử nghiệm tại Uganda và Nam Phi chỉ ra CrAg LFA có độ nhạy và độ đặc hiệu tương ứng là 99,3% và 99,1% trong DNT [38].