Chương 2 ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
2.1. Đối tượng, thời gian, địa điểm nghiên cứu
2.1.1. Đối tượng nghiên cứu
2.1.1.1. Đối tượng nghiên cứu xây dựng quy trình chế tạo bộ sinh phẩm
- 01 chủng nấm C. neoformanschuẩn ATCC (American Type Culture
Collection - Hệ thống Chủng chuẩn của Mỹ) mã số ATCC® 90113
Hình 2.1. Chủng chuẩn nấm C. neoformans ATCC@ 90113 (Chủng chuẩn phục vụ cho nghiên cứu này) (Chủng chuẩn phục vụ cho nghiên cứu này)
- 07 chủng C. neoformans nuôi cấy từ dịch não tủy bệnh nhân người Việt Nam có ký hiệu là Vn_N17, Vn_N41, Vn_N57, VN_N58, Vn_N61, Vn_N117, Vn_N132.
- Các chủng vi nấm thuộc giống Candida gây bệnh thường gặp như: C. albicans, C. tropicalis, C. krusei, C. parapsilosis, C. glabrata.
- Các chủng vi khuẩn gây bệnh ở người: Neisseria meningitidis, Haemophilus
influenzae, Streptococcus pneumoniae, Escherichia coli, Streptococcus suis, Staphylococcus aureus, Acinetobacter baumannii, Pseudomonas aeruginosa.
2.1.1.2. Đối tượng nghiên cứu đánh giá độ nhạy, độ đặc hiệu, tính ổn định của bộ sinh phẩm.
Bộ sinh phẩm nested PCR #A011- 02 sản phẩm của mục tiêu 1; - 01 chủng nấm C. neoformanschuẩn mã số ATCC@ 90113;
- 30 mẫu dịch não tủy của bệnh nhân có biểu hiện viêm màng não nhưng không nhiễm nấm C. neoformans thu thập ở Bệnh viện Quân y 103 – đã được kiểm tra bằng phương pháp nuôi cấy và bộ sinh phẩm C. neoformans PCR Kit EP-42720 của hãng Norgen. Trong đó:
+ 20 mẫu dịch não tủy được gây nhiễm nấm C. neoformans giả định
(mẫu dịch não tủy không nhiễm nấm được thêm tế bào nấm C. neoformans
vào) – được sử dụng như mẫu dương.
+10 mẫu dịch não tủy không nhiễm nấm – sử dụng như chứng âm.
- 51 chủng nấm C. neoformans được phân lập từ dịch não tủy của bệnh nhân ở Bệnh viện Quân y 103, Bệnh viện Bệnh Nhiệt đới Trung ương, Bệnh viện Chợ rẫy và Bệnh viện Phạm Ngọc Thạch (Đã được khẳng định bằng phương pháp nuôi cấy, soi xác định hình thái bằng nhuộm mực tàu và định loài bằng sinh học phân tử).
- 120 mẫu dịch não tủy của bệnh nhân có triệu chứng lâm sàng viêm màng não thu thập ở Bệnh viện Quân y 103 và Bệnh viện Phạm Ngọc Thạch.