Chương 3 : KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
3.6. So sánh hiệu suất sinh tổng hợp vanillin giữa hai hệ vector
pRSET
Dựa trên sự phân tích chuyển hóa ở chủng E. coli BL21(DE3)/pET-GEF,
chúng tôi đã tiến hành phân tích tương tự với chủng E. coli BL21(DE3) tái tổ hợp mang vector pRSET-GEF. Hiệu quả chuyển hóa axit ferulic thành vanillin giữa hai hệ thống vector được so sánh trên hình 3.27.
Hình 3.27: So sánh hiệu suất sinh tổng hợp vanillin từ cơ chất axit
ferulic sử dụng các chủng E. coli tái tổ hợp mang vector pET22-GEF và pRSET-GEF
Hình 3.27 cho thấy hệ thống biểu hiện trên nền tảng vector pET22b(+) có hiệu suất sinh tổng hợp vanillin đạt 1.44 g/L cao hơn so với mức 1.17 g/L của vector pRSET-A. Một trong những cơ sở có thể lý giải hiện tượng này là do ở hệ thống pET22b(+) protein tái tổ hợp được dung hợp với trình tự tín hiệu pelB và do đó được định vị ra ngồi khoang chu chất, nhờ đó giảm được tác dụng phân hủy của các protease nội bào và tăng khả năng tiết ra môi trường.
Mặt khác, vector pRSET-A với điểm khởi đầu sao chép pUC được xếp vào nhóm vector có số lượng bản sao lớn (khoảng 500 bản sao/tế bào) trong khi pET22b(+) với điểm khởi đầu sao chép pBR322 thuộc nhóm số lượng bản sao thấp (khoảng 15 đến 20 bản sao/tế bào). Kết quả so sánh 2 hệ vector cho thấy số lượng bản sao của vector có ảnh hưởng đến mức độ sinh tổng hợp vanillin. Công bố trước đây của Jones và cộng sự [34] kết luận số lượng bản sao của plasmid không ảnh hưởng tới sinh tổng hợp của chất đích. Tuy nhiên, dữ liệu của chúng tôi đồng thuận hơn với công bố của Barghini và cộng sự [12] khi vanillin được tổng hợp mạnh hơn khi sử dụng plasmid số lượng bản sao thấp và promoter hiệu suất thấp.
Hiệu suất sinh tổng hợp vanillin trong nghiên cứu của chúng tôi cao hơn mức 580 mg/L theo Yoon và cộng sự (2005) [84] khi gene gltA chưa
được sử dụng. Dữ liệu này góp phần khẳng định vai trò của gene gltA trong sinh tổng hợp vanillin bằng E. coli tái tổ hợp vì gene này giúp tái sử dụng