Chương 1 : TỔNG QUAN TÀI LIỆU
2.4. Phương pháp nghiên cứu
2.4.13. Lên men sinh tổng hợp vanillin từ cơ chất axit ferulic
Lên men E. coli sinh tổng hợp vanillin bổ sung cơ chất axit ferulic
được thực hiện theo hai phương pháp.
Phương pháp thứ nhất: Sử dụng bình tam giác theo Yoon và cộng sự.
Tương tự như mục 3.4.12 tuy nhiên thay đổi thể tích ni thành 1 lít ni trong bình tam giác 2 lít.
Phương pháp thứ hai: Sử dụng hệ thống lên men Labfors, quy trình
theo Phùng Thu Nguyệt và CS (2009) với một số cải tiến [4].
Chủng lên men: Chủng E. coli BL21(DE3) tái tổ hợp mang vector pET-
GEF và pRSET-GEF. Chủng được chuẩn bị bằng cách ni trong bình tam giác chứa 50 ml môi trường LB ở 37oC qua đêm, lắc 200 v/p.
Cơ chất axit ferulic: Axit ferulic được hòa tan trong môi trường LB và
chỉnh pH về 7.0 bằng NaOH 2N.
Thiết bị lên men: Sử dụng hệ thống lên men Labfors dung tích 2 lít của
hãng Infors HT. Hệ thống lên men được điều khiển bằng phần mềm Iris V5.3.
Môi trường lên men: Môi trường lên men LB được bổ sung kháng sinh
Ampicilin 100 µg/mL. Chất phá bọt polypropylene glycol (PPG) được bổ sung với tỉ lệ 1/10000.
Điều kiện lên men: Các điều kiện lên men được thiết lập pH 7,0; nhiệt
độ 370C; khí được sục 1 lít/phút; tốc độ khuấy 200 vịng/phút. Giống lên men chuẩn bị qua đêm được cấy vào bình lên men theo tỉ lệ 1/1000. Một số thơng số chính của q trình lên men gồm pH, nhiệt độ, tốc độ khuấy… được điều khiển tự động bằng phần mềm Iris V5.3.
Cảm ứng sinh tổng hợp vanillin từ axit ferulic: Khi OD260 đạt mức 0,4
trong bình lên men, cơ chất axit ferulic và chất cảm ứng IPTG được bổ sung vào dịch lên men ở các nồng độ lần lượt là 3 g/L và 0,5 mM.
Thu dịch nổi chứa vanillin: Sau khi cảm ứng ở các mức thời gian xác
định, quá trình lên men được ngừng lại. Tế bào E. coli được loại bỏ bằng ly
tâm. Dịch nổi chứa vanillin được thu nhận.