Địa điểm và thời gian nghiên cứu

Một phần của tài liệu (LUẬN văn THẠC sĩ) nghiên cứu tạo chủng escherichia coli có khả năng sản xuất vanillin từ axit ferulic (Trang 49 - 50)

Chương 1 : TỔNG QUAN TÀI LIỆU

2.2. Địa điểm và thời gian nghiên cứu

Địa điểm: Viện Khoa học sự sống, Đại học Thái Nguyên.

2.3. Nội dung nghiên cứu

Nội dung 1: Tách dòng gene

Ba genes gltA mã hoá citrate synthase, fcs mã hóa feruloyl-CoA

synthase, và ech mã hóa enoyl-CoA hydratase/aldolase được tách dòng lần

lượt từ Escherichia coli, Amycolatopsis Pseudomonas fluorescent. Các

dịng được giải trình tự và phân tích trình tự đảm bảo biểu hiện được protein mã hóa. Các chủng vi sinh vật được đặt mua từ Ngân hàng Vi sinh vật Đức (Leibniz Institute DSMZ-German Collection of Microorganisms and Cell Cultures) và Ngân hàng Vi sinh vật của Đại học Quốc gia Hà Nội.

Nội dung 2: Thiết kế vector biểu hiện mang các genes gltA, ech và fcs

Các gene sau khi được tách dịng và xác định trình tự được chuyển sang vector biểu hiện dưới dạng thiết kế 1 polycistronic operon để đảm bảo biểu hiện đồng thời cả 2 gene đích. Đề tài sử dụng các hệ vector khác nhau nhằm tìm ra hệ thống có năng lực sản xuất vanillin mạnh nhất.

Nội dung 3: Đưa vector vào tế bào chủ, cảm ứng biểu hiện các gene đích

Vector biểu hiện sau khi được kiểm tra bằng phương pháp lập bản đồ giới hạn sẽ được đưa vào chủng E. coli BL21(DE3) để sản xuất ba enzyme

mã hóa con đường chuyển hóa vanillin.

Nội dung 4: Phân tích vanillin sản phẩm tạo thành

Vanillin sản phẩm tạo thành từ axit ferulic dưới sự xúc tác của các enzyme feruloyl-CoA synthase và enoyl-CoA hydratase/aldolase do E. coli

tái tổ hợp tạo ra sẽ được phân tích định tính và định lượng bằng phương pháp Sắc kí lỏng hiệu năng cao (HPLC). Mẫu chuẩn sử dụng trong HPLC là vanillin tinh khiết 99% cung cấp bởi hãng Sigma-Aldrich.

Một phần của tài liệu (LUẬN văn THẠC sĩ) nghiên cứu tạo chủng escherichia coli có khả năng sản xuất vanillin từ axit ferulic (Trang 49 - 50)

Tải bản đầy đủ (PDF)

(103 trang)