Vector pTZ57R/T là vector tách dịng TA, có kích thước 2886 bp, được thiết kế dựa vào hoạt tính terminal transferase của enzyme Taq-ADN
polymerase trong phản ứng PCR. Vector pTZ57R/T có đầu dính là một nucleotide T (thymine), cho phép tách dịng tất cả các trình tự khuếch đại của phản ứng PCR do enzyme Taq-ADN polymerase tổng hợp.
Trong cấu trúc của vector pTZ57R/T bao gồm hai hệ thống chọn lọc, cho phép chọn lọc các dòng tế bào mang plasmid đã gắn xen trình tự đích thành cơng.
- Hệ thống chọn lọc thứ nhất là gene kháng kháng sinh ampicilin mã hóa cho enzyme phân giải kháng sinh ampicilin, điều này đồng nghĩa với việc các tế bào mang vector pTZ57R/T có thể sống sót và phát triển trên mơi trường có chứa kháng sinh ampicilin.
- Hệ thống chọn lọc thứ hai là hệ thống chỉ thị màu Lac-operon, hệ thống này bao gồm gene LacZ mã hóa cho enzyme β-galactosidase và Lac-promoter cảm ứng bởi IPTG. Với các tế bào chủ mang vector pTZ57R/T tự đóng vịng hay khơng có sự gắn xen xảy ra, Lac-operon hoạt động bình thường.
Trong mơi trường có IPTG, enzyme β-galactosidase được tổng hợp. Enzyme này xúc tác cho phản ứng chuyển hóa cơ chất X-gal thành chất có màu xanh, làm cho khuẩn lạc bao gồm các tế bào này có màu xanh. Trường hợp thứ hai là khi cấu trúc của Lac- operon bị phá vỡ do gắn xen thành công, dẫn đến enzyme β-galactosidase khơng được tổng hợp, khơng có sự phân giải cơ chất X-gal nên các khuẩn lạc này sẽ có màu trắng.
Bảng 2.1: Các thành phần của vector pTZ57R/T
Thành phần Vai trò Vị trí
Vị trí đa tách dịng (Multiple cloning site)
Cắt kiểm tra đoạn xen được nhân dòng, phục vụ cho công việc lập thư viện ADN
615-695
LacZα
Chọn lọc, giúp phân biệt các dòng tế bào mang vector có và khơng có đoạn xen
449-739 Gene kháng kháng sinh
ampicilin (Amp resistant gene)
Chọn lọc, nhằm duy trì các dịng tế bào
mang vector pTZ57R/T 1896-2756 Điểm khởi đầu sao chép
rep (pMB1)
Chịu trách nhiệm cho sự tái bản của
vector pTZ57R/T trong E. coli 1122-1736 T7 promoter Phiên mã in vitro đoạn chèn AND với T7
RNA polymerase 697-716
Phage f1 origin Tổng hợp 1 chuỗi AND đơn 2-457
Vector biểu hiện pRSET-A
Đây là vector biểu hiện sử dụng promoter T7 là promoter biểu hiện mạnh. Sơ đồ vector được thể hiện trên hình 3.2. Các thành phần và vai trò của chúng trong vector được thể hiện ở bảng 3.2.