- Mô phđn sinh chồị Củ
116 KỸ THUẬT CHUYỂN GEN VĂ ÚNG DỤNG CỦA NÓ
• Câc h ạ i vectơ đựa trẽn Tĩ-pìasmid
Ti-plasmid khổ được dùng trự c tiếp trong câc th í n ^ i ộ m chuyến gen, vỉ nd cổ kích thưốc lớn vă m a ĩ^ câc gen gđy khối u; hơn nữa ADN của Ti-plasmid cố quâ nhiều chỗ đ ế câc enzym giới hạn cổ th ế cât, trong khi đđ người ta chỉ cần m ột số ít vị trí như vậy m ă thdỉ.
l\iy nhiín, Ti-plasmid cổ th ể cung câp cho ta nhữ ng y íu tổ cân th iết để th iết kế những vectơ hữu ích cho kỹ th u ậ t chuyển gen. Thường người ta hay sử dụng câc Ti-
VIR RES RES C o l EI B MSC RK2 VIR o riT
Hình 6.6. Sơ đ ĩ câc kệ lầổi^ vecta tiÌH hợp (A) vă nhị thí (B):
Vlr vùng gậy độc; HCM : câc vùng tuxmg đ&ng, mă trong phạm vi đó sự tâi t& hợp (trao đối chĩo) cố tbề xảy ra d&i (fín S»Ị hợp nhất giữa lêi piasmid; RB vă L& câc đoạn trật tự bi£n pbải vă u đ 2Sbp d â T-AÊ (
LB boặc RB hoặc cả hai có thề cố ở vectơ tnng glan^ MCS: đoạn mang câc tr^ tự nudeodt đề enzym giối hạn nhận bĩỄt; PTM: gcn chi th| săng lọc biến ở t í băo Uiực vật; RES: gen chi thi Mỉ^g chất khâng sinh đề
chọn lcc ỏr tế băo v ĩ Uiuần; OrfT:Êỉni vận chuytn; Ecdl: vùng klỊổi đầu ^ tâi bản, từ plasmid ColỈÍ; RK2; vùng có phõ tâi bản rộng ờ câc vật chủ, cố ngudn gốc từ piasmid pRK2.
co sỏ DI TRUYỀN CHỌN GIỐNG THựC VẬT 117 plasmid, mă trong đó vùng T-ADN gđy khối u đê bị tâch bỏ vă thay th ế văo đđ lă câc gen trội chỉ thị cho chọn lọc - thường lă câc gen vi khuẩn khâng chất khâng sinh, như kanamycin. Trước đđy, người ta hay dùng câc gen chỉ thị được kiểm soât bởi prom otor vă câc tín hiệu polyadenin hoâ được tâch ra từ câc gen vùng T-ADN như octopine synthase hay nopaline synthasẹ Găn đđy, người ta hay sừ dụng câc prom otor m ạnh hơn được tâch ra từ virut khảm bâp cải, như CaMV35S vă CaMV19S. Tuy nhiín, kích thước lớn của Ti- plasmid rấ t khó khăn cho việc gân trực tiếp m ột phđn đoạn ADN văo vùng