- Mô phđn sinh chồị Củ
KỸ THUẬT RPLP TRONG NGHIÍN cứu DI TRUYỀN VĂ CHỌN GIỐNG THựC VẬT
7.4. SO SÂNH VIỆC XÂC ĐỊNH GEN BẰNG PHƯỚNG PHÂP DI TRUYẾN THỒNG THƯỒNG VỐI PHDỒNG p h â p RFLP
Khi so sânh những gen được xâc định bằng phương phâp di truyền thống thường với những chi thị RFLP người ta nhận thấy răng, những chỉ thị RFLP có nhiều ưu điểm hơn tro n g việc xđy dựng bản đồ di truyín. Trong đó, có một văi ưu điểtn rố răng n h ấ t dưới đđỵ
• Tận dụng được lính biẽn dị tự nhiín
Dể xđy dựng được băn đồ di truyền trín một đoạn nhiễm sâc th ể qua hiện tượng phftn ly, ngưòi ta phải phđn biệt được câc đoạn đó trong cẠp nhiễm sâc th ể bố mẹ. Nếu những gen nằm trín câc đoạn nhiễm sâc thể đđ thỉ mỗi dạng bố mẹ phải chứa những alen khâc nhau, chẳng hạn, trạng thâi lặn vă trạng thâi đột biến. Nói chung, m ột th ể biến dị được hình th ănh nhờ có quâ trinh đột biến. Trong khi đđ, việc lập bản đố di tru y ền dựa văo phương phâp RFLP lại tận dụng tính biến dị tự nhiín phong phú về trìn h tự câc nucleotit trong ADN mă không cần đến quâ trình phât sinh đột biến. Vă sự đa d ạn g về RFLP nhu vậy ở bất kỳ một loăi thực vật năo có thể ndi lă vô tận.
• Phúí hiện tính biến dị cùa ADN trong câc giai đoạn phâi triển hoặc ở câc cơ quan khâc
nhau cùa thực vật
Dể nghiín cứu sự phđn ly của một đoạn nhiễm sâc th ể băng câch phđn tích hiện tượng phđn ly của những tính trạng di truyền theo phương phâp thông thường, thì ta phải phụ thuộc văo sự biểu hiện của gen. Phương phâp phđn tích như vậy có th ể r ấ t phức tạp. Ví dụ, gen chỉ có th ể biểu hiện trong niột mô năo đó trong m ột giai đoạn p h ât triển năo đtí (như, gen qui định tính trạng mău sâc hoa chí biểu hiện khi cđy cđ hoa), hoậc tro n g những điều kiện môi trường năo đó. Trong một văi trường hợp, việc nghiín cứu m ột gen năo đó lă rấ t khó khản vă mất nhiều thời gian.
TVong khi đó, do những chl thị RFLP cho phĩp trực tiếp phât hiện ra tính biến dị tro n g ADN, nín ở bất kỳ một giai đoạn phât triể n năo vă hầu như ở b ất cứ bộ phận năo cùa cđy ta cũng cd th ể tâch chiết được taột lượng nhỏ ADN để phđn tích.
• Chỉ thị RFLP khổng phụ thuộc văo hiệu quả kiểu hình
N hững chỉ thị RFLP phản ânh sự biến dị tự nhiín trong trỉnh tự bazơ nitơ của phđn tử ADN thực vật. Trong phần lớn câc trường hợp, nó khỗng gđy ra hiệu quả vỉ kiểu hình. Một số lượng vô cùng lớn của những chi thị RFLP có m ặt một câch tự nhiín trong bất kỳ m ột cơ th ể thực vật năọ Diều năy tương phản với câc tính trạ n g được th ể hiện ra kiểu hình. Trong nhiều trường hợp, chỉ một văi tính trạ n g được th ể hiện ra kiểu hình cd th ể được duy trì trong m ột cđy năo đtí; vỉ kiểu hỉnh đột biến thường có hại đối vối cđy hoặc vi quâ trin h đột biến xuất hiện ở những cđy khâc nhaụ Bởí vậy, cần phải ctí thời gian để chuyển những tính trạ n g ấy từ c&y năy qua cđy khâc bằng còn đường giao phốị Do câc cx) th ể thực vật có một sự sai khâc lớn về RFLP nín người ta cd th ể sử dụng nó để xđy dựng bản đồ RFLP chi tiết m ă khống cần chi phí nhiều về sức người, sức của vă thời gian như câc phương phâp xđy dựng bản đố di truyền kinh điển trước đđỵ
• Cức chỉ thị RFLP khđng phụ thuộc văo môi trường
Câc gen nằm trín ĐDN được phiín m ê thănh mĐRN vă sau đố được dịch tnê để tổng hợp protein. Protein sỗ qui định tính trạ n g của cơ thể. Hiệu quả biểu hiện của protein thường được th ể hiện qua hoạt tính enzym của nó hoặc khả năng liín kết vói một văi th ăn h phăn của tế băọ T ất cả những giai đoạn trín đều cđ th ể chịu ảnh hưởng của môi trường. Do cẩc chỉ thị RFLP khỏng phụ thuộc văo sự biểu hiện của gen nín nổ khống phụ thuộc văo môi trường. Những chi thị RFLP chỉ th ể hiện sự có m ặt hoặc khổng có m ậ t của câc trình tự bazơ nitơ đặc trư ng mă thôị
Câc chì thị RFLP khổng phụ thuộc văo hiện tượng tương tâc gen
Dể nghiín cửu câc gen thường n ^ d i ta phải đựa văo sự biểu hiện của gen. Tuy
nhiín, hiệu quả kiểu hỉnh của chúng thường bị ảnh hưởng bởi quâ trìn h điều chinh của câc gen khâc. Một trưòng hợp đơn giản n h ất iă hiện tượng tính trội hoăn toăn. Nhiều gen đột biến thường tồn tại d trạn g thâi lặn. v ì thế, chúng chi cổ th ể được phât hiện ở trạ n g thâi đồng hợp tử; còn cơ th ể dị hợp tử vă đông hợp tử trội thì có chung một kiểu hình. IVong khi đd, câc chỉ thị RFLP v% cả 3 kiểu gen của m ột tính trạ n g cđ th ế được phđn biệt với nhaụ Hơn nữa, ntíi chung những tính trạ n g sẽ biểu hiện kiểu hỉnh khổng giống nhau trong những nền di truyền khâc nhau, do cd sự tương tâc giữa câc gen. 'IVong
khi đtí, câc chỉ thị RFLP phản ânh trực tiếp kiểu gen, chúng không phụ thuộc văo một
gen năo khâc vă m ột chỉ thị RFLP sẽ duy tri tính đặc trư ng của nó tro n g b ất kỳ m ột nôn cấu trú c di truyền năọ
7.5. XĐY DựNG BẤN ĐÒ DI TRUYẾN BẰNG CÂCH s ử DỤNG CHÌ THI RFLP
Đối với một văi cđy trồng, ví dụ cđy lúa, că chua vă ngô người ta đă lập được bản d& RFLP. Quâ trin h lập bản đồ RFLP được tiến hănh theo m ột sổ bưóc như sau :