V. Tầm quan trọng của táI tổ hợp trong tự nhiên
5. Điều hoà ở mức độ sau dịch mã
CHƯƠNG 7: CÁC KỸ THUẬT SINH HỌC PHÂN TỬ Ị LẬP BẢN ĐỒ CÁC ĐIỂM GIỚI HẠN
Ị LẬP BẢN ĐỒ CÁC ĐIỂM GIỚI HẠN
Phần lớn cỏc ủoạn ADN ủều cú cỏc ủiểm nhận biết ủối với nhiều enzyme giới hạn khỏc nhau, và thường rất hữu ớch nếu ta biết vị trớ tương ủối của một sốủiểm nàỵ Kỹ thuật dựng ủể làm việc này gọi là lập bản ủồ cỏc ủiểm giới hạn (Restriction map). Kỹ thuật này bao gồm việc cắt một ủoạn ADN bằng một số enzyme giới hạn lựa chọn, dựng riờng lẻ hoặc dựng cỏc tổ hợp enzyme khỏc nhaụ Cỏc ủoạn sinh ra ủược chạy trờn gel agarose và ủược xỏc ủịnh kớch thước. Từ số liệu nhận ủược, vị trớ tương ủối của cỏc ủiểm cắt ủược xỏc ủịnh.
Giả sử chỳng ta muốn lập bản ủồ ủiểm cắt của cỏc enzyme BamHI, EcoRI và PstI ủối với ủoạn ADN quan tõm cú chiều dài 15kb. Nhiều thớ nghiệm cắt ủược thực hiện, cỏc ủoạn ADN nhận ủược từ những thớ nghiệm này ủem phõn tớch và chiều dài của chỳng ủược xỏc ủịnh. Vỡ mỗi enzyme riờng lẻ cho ra hai ủoạn ADN, nờn ta cú thể kết luận rằng ADN cú một ủiểm cắt ủối với mỗi enzymẹ nếu cắt mỗi lần bởi hai enzyme thỡ bản ủồ sẽ cú thờm một ủiểm cắt (nhận ủược ba ủoạn cắt). Nếu cắt bằng enzyme ta sẽ cú ba ủiểm cắt với bốn ủoạn cắt. Bản ủồ cỏc ủiểm cắt của ủoạn ADN 15kb với ba enzyme núi trờn ủược nờu trờn hỡnh 2.3
Ứng dụng:
- Sử dụng phương phỏp này ủể so sỏnh sự giống nhau và khỏc nhau giữa ADN của người, Chimpanzee, Gorgilla, Orang-Utan, bản ủồ hạn chế tương ủối giống nhau, chỉ sai khỏc ở một số chi tiết nhỏ.
- Trong KTDT:
+ Xỏc ủịnh xem ủoạn ADN gắn với vật chuyển gen (vector) cú giống nhau hay khụng? VD: Cú một ủoạn plasmid gần một ủoạn gen tạo insulin. Để kiểm tra ủoạn plasmid này người ta tỏch plasmid và dựng enzyme RE cắt ủoạn gen mới ghộp và dựng phõn tớch bản ủồ hạn chếủể so với gen insulin chuẩn xem cú trựng hay khụng? Nếu khụng trựng thỡ ủú là gen lạ.
+ Nối cỏc ủoạn rời thành ủoạn dài (dựng trong trường hợp gen phõn tớch là những gen dài)
VD: Cú ủoạn ADN dài nhưng trong quỏ trỡnh thớ nghiệm bị cắt rời ra, khụng biết ủược ủõu là ủầu, ủõu là ủuụị
+ Ứng dụng trong chọn giống thực vật
VD: Ta cú giống lỳa A, B, C, D cần xỏc ủịnh xem cỏc giống lỳa này cú dễ bị mắc một bệnh nào ủú hay khụng? Người ta lấy một ủoạn gen bị bệnh ủem phõn tớch và phõn tớch gen của những giống lỳa ủú xem cú trựng hợp hay khụng? nếu cú thỡ giống lỳa ủú bị loại và chỉ giữ lại những giống khụng cú gen bị bệnh.
Một trường hợp nữa trong chọn giống lai giữa lỳa mỡ và lỳa mạch. Muốn biết nhiễm sắc thể thứ mấy trong bộ nhiễm sắc thể lai (cả lỳa mỡ và lỳa mạch) là của lỳa mỡ hay lỳa mạch. Muốn vậy người ta lấy ủoạn cắt hạn chế và xỏc ủịnh là ủoạn gen ủú của lỳa mỡ hay lỳa mạch và ủem so sỏnh với ủoạn nhiễm sắc thể cõy lai xem của giống cõy nàọ