V. KỸ THUẬT NHÂN AND ĐẶC HIỆU
c. Cỏc phương phỏp truyền ADN khỏc
Tạo ra cỏc tế bào trần (protoplasts) là những tế bào mà thành của chỳng ủó ủược loại bỏ bằng enzyme, sau ủú cỏc tế bào trần cú thể ủược biến nạp bằng cỏc kỹ thuật như mở lỗ bằng ủiện, khi một xung ủiện ủược sử dụng ủể tạo ra cỏc lỗ trờn màng tế bào mà qua ủú ADN cú thể xõm nhập. Cỏc tế bào trần cú thể ủược tỏi sinh (tạo vỏ mới). Ngoài ra, tế bào trần cũn cú vai trũ quan trọng trong việc tạo ra cỏc tế bào lai thực vật khi dung hợp chỳng với nhaụ
Một loại phương phỏp biến nạp khỏc cú thể ủưa ADN vào bờn trong tế bào là cỏc phương phỏp vật lý, ủú là kỹ thuật vi tiờm, ủược sử dụng thành cụng cả ủối với tế bào thực vật và ủộng vật. Tế bào ủược giữ trờn một ống thuỷ tinh ủầu tày, cũn chiếc kim nhọn ủược dựng ủểủõm xuyờn qua màng tế bàọ
Hỡnh 8.4. Phương phỏp vi tiờm
Gần ủõy người ta ủó hoàn thiện một phương phỏp tỏ ra rất hữu hiệu ủể biến nạp tế bào thực vật, gọi là kỹ thuật bắn ADN vào tế bàọ ADN ủược dựng ủể bao bọc cỏc hạt vonfam cực nhỏ gọi là vi ủạn, khi bắn, chỳng ủược tăng tốc trờn viờn ủạn lớn là bộ phận ủược bắn ủi do ngũi thuốc nổ chỏỵ Tại một ủầu của “sỳng” cú một lỗ nhỏ chặn viờn ủạn lớn lại nhưng vẫn cho vi ủạn chui quạ Khi nhằm bắn vào tế bào, cỏc vi ủạn sẽủưa ADN vào trong tế bào, và một số trường hợp biến nạp sẽ thực hiện thành cụng.
Hỡnh 8.5. Phương phỏp sử dụng sỳng bắn gen
IIỊ THU NHẬN GEN VÀ CÁC PHƯƠNG PHÁP GẮN GEN VÀO VECTOR 1. Thu nhận gen 1. Thu nhận gen
ạ Thu nhận gen từ genome (Genomic DNA)
- Từ ADN của người, của virus hay vi khuẩn, lấy toàn bộ rồi cắt ra từng ủoạn ngắn, cú thể cắt bằng restriction endonuclease, ta sẽ nhận ủược từng ủoạn, trong ủú cú chứa gen.
+ Cú thể dựng hoỏ học xử lý, cắt ủứt ADN thành từng ủoạn.
+ Cú thể dựng cơ học: Nghiền hoặc lắc mạnh ủể ADN góy ra thành nhiều ủoạn, ngẫu nhiờn cú những ủiểm nhận biết cũng nằm trong ủú.
- Tiếp theo, lắp palssmid cho nú biểu hiện gen, trong thực tế cú những ủoạn gen biểu hiện ủược, cú những ủoạn khụng.
* Nhược ủiểm của phương phỏp này là :
+ Trong hệ gen của eukaryote dễ gặp cỏc intron, do ủú khi phõn tớch khụng cho sản phẩm gỡ cả.
+ Cú nhiều ủoạn gen cần thiết nhưng lại bị cắt nhỏ ra, cỏc ủoạn nhỏ cú thể gắn vào hai ủoạn gen khỏc nhau, do ủú khụng biểu hiện ủược, muốn biết ủược nú nằm ở vị trớ nào ủũi hỏi phải rà soỏt hết nhiễm sắc thể (walking along chromosome).