nuơi cấy mẻ-bổ sung ở qui mơ pilot 30L
Sau khi xác định được điều kiện nuơi cấy mẻ-bổ sung tối ưu để thu được dịch lên men cĩ mật độ tế bào cao cĩ khả năng biểu hiện 6xHis-MPI ở qui mơ phịng thí nghiệm, chúng tơi tiến hành khảo sát lên men mẻ-bổ sung mật độ cao
Luận án Tiến sĩ Vật liệu – Phương Pháp
ở qui mơ pilot thể tích 30 L. Thể tích mơi trường ban đầu là 16 L (mơi trường aH-LBp), thể tích mơi trường nạp bổ sung là 14 L (Mơi trường bổ sung). Thành
phần mơi trường được trình bày trong Bảng 2.2. Giống sử dụng cho quá trình này
được tiến hành theo phương pháp như đã mơ tả trong mục 2.4.5, tỷ lệ nạp giống
là 5%. Quá trình nuơi cấy được kiểm sốt ở nhiệt độ 37oC, pH 6,8-7,2 (bằng
NH4OH 25%), tốc độ khuấy trộn (14Hz), tốc độ sục khí 1Vvm (L/L/phút). Khi
mơi trường đđã cạn kiệt chất dinh dưỡng (được nhận diện khi pH và DOC tăng
lên), tiến hành nạp bổ sung Mơi trường bổ sung liên tục theo nhu cầu sử dụng của chủng. Khi nạp được khoảng 80% Mơi trường bổ sung (khoảng sau 8 giờ nuơi cấy), tiến hành cảm ứng bằng IPTG với nồng độ 0,25 mM. Nhiệt độ cảm
ứng được kiểm sốt ở 30oC, thời gian cảm ứng 20 giờ. Trong thời gian này tiếp
tục nạp hết lượng Mơi trường bổ sung cịn lại. Trong quá trình nuơi cấy thực hiện
lấy mẫu cách 2 giờ/lần để đo OD600nm. Khi kết thúc lên men, thu mẫu để phân
tích hàm lượng tế bào khơ, đánh giá mức độ biểu hiện và thu nhận sinh khối. Trong trường hợp lên men thu nhận sinh khối để thực hiện các nghiên cứu sau lên men như thu nhận và tinh chế 6xHis-MPI, MPI… chúng tơi tiến hành trên qui mơ 30 L với mơi trường cĩ nồng độ chất dinh dưỡng chỉ bằng 25% so với thiết kế.