CHƯƠNG III: XÂY DỰNG MÔ HÌNH NUÔI TRỒNG THỦY SẢN
1- Có sự phối hợp nhịp nhàng giữa các nhà khoa học, cán bộ các cấp Hội phụ nữ (từ Trung ương tới địa phương), sự ủng hộ của lãnh đạo địa
5.2. Nghiên cứu độc tính cấp và bán trường diễn của BD1
Theo phương pháp của Abraham W. như đã mô tả trong phần phương pháp nghiên cứu. Các nhóm chuột nhắt trắng 12 - 12 con đ−ợc cho uống ở 6 mức liều theo thứ tự tăng dần. Số chuột chết đ−ợc đếm theo nhóm trong vòng 72 giờ. Kết quả đ−ợc trình bày ở bảng 63.
Bảng 63: Độc tính cấp của BD1 theo đ−ờng uống
k xi
(g/kg) mi n - mi mi
n - mi mi (n-mi) zi mi - zi
1 4 0 12 - - - -
2 6 1 11 1/11 11 1 1
3 8 3 9 3/9 27 3 9 4 10 5 7 5/7 35 5 25 5 12 7 5 7/5 35 7 49 6 14 9 3 9/3 27 9 81
7 16 12 0 - - - -
∑=6 - 37 - - 135 - 165
áp dụng công thức tính:
LD50 = xk − d 2
− d n
×
k-1
Σ
i=2
mi
Ta cã: LD50 = 16 - 2 2
- 2 12
x 25 =10,84
* TÝnh SE:
SE =
d n
1
n−1 ×
k−1
Σ
i=2
mi (n−mi)
Ta cã SE:
SE =
2 12
1 11
135 =0,58
* Tính t0,5: theo công thức:
t0,5 = 2 1 + 1 f Trong đó:
f = (n − 1) × n × Σmizi − (Σmi)2 Σmi (n − mi)
TÝnh f:
f = (12-1) x
12 x1980-1369
135 = 49,79
Do đó:
t05 = 2 1+ 1
49,79 =2,04
CI = t05 × SE = 2.04x0,58=1.18
Do đó: LD50 = 10,84 ± g/kg TLCT (tức là từ 9.66-12.02 g/kg TLCT) Chế phẩm BD1 tương đối ít độc, theo đường uống ở chuột nhắt trắng.
5.2.2. Độc tính của BD1 khi cho động vật uống tr−ờng diễn
Theo phương pháp của Abraham W. và theo quy định của WHO về an toàn thuốc cổ truyền dân tộc và hợp chất có nguồn gốc thiên nhiên.
a. ảnh hưởng của BD1, cho uống trường diễn đối với trọng lượng gan, lách, thận động vật
Các nhóm chuột nhắt trắng 10-12 con, trọng l−ợng cơ thể 20 ± 2 g đ−ợc sử dụng trong thí nghiệm này.
Nhóm chứng cho uống CMC 2% x 0,2 ml cho mỗi chuột một lần hàng ngày. Nhóm thuốc thử cho uống BD1 liều 0,30 g/kg thể trọng chuột, liên tục trong 35 ngày. Ngày thứ 36, chuột đ−ợc giết bằng cách sau khi gây mê nhẹ bằng Ether ethylic, phẫu tích nội tạng, bóc tách dạ dày, gan, lách, thận. Kiểm tra đại thể bằng kính lúp cầm tay để đánh giá tổn thương. Sau đó dùng cân phân tích cân các tạng gan, lách, thận. Trọng l−ợng của mỗi nhóm tạng trên
đ−ợc so sánh giữa nhóm chứng và nhóm thử. Tỷ lệ trọng l−ợng của mỗi tạng so với trọng l−ợng cơ thể đ−ợc xác định theo nhóm và so sánh với nhau.
Các kết quả đ−ợc trình bày ở bảng 64.
Bảng 64: Chỉ số tăng trọng l−ợng ở các nhóm trắng, nhóm chứng, thuốc nghiên cứu và thuốc tham chiếu khi cho uống mức liều 0,30 g/kg
tr−ờng diễn BD1 trên chuột nhắt trắng Nhãm N/C
Thêi gian N/C
Trắng (1)
Chứng CMC 2%
(0,1ml/10g) (2)
Thử BD1 0,30 g/kg
(3)
n 10 10 10
Tuần thứ I ⎯x 18,70 18,40 19,10
SD 1,10 1,40 1,20
n 10 10 10
Tuần thứ II ⎯x 20,40 19,80 21,40
SD 1,40 1,20 1,60
n 10 10 10
Tuần thứ III ⎯x 23,10 21,20 22,80
SD 1,12 1,20 1,18
n 10 10 10
Tuần thứ IV ⎯x 24,90 24,05 24,30
SD 2,10 1,60 1,80
n 10 10 10
Tuần thứ V ⎯x 25,60 26,10 26,15
SD 1,80 1,20 0,85
p1,2 > 0,05
p2,3 > 0,05
P
p3,1 > 0,05
* Nhận xét: Các kết quả ở bảng 64 cho thấy chỉ số tăng trong l−ợng so sánh theo từng nhóm và tỷ số này giữa các nhóm trắng, chứng, thuốc nghiên cứu khác nhau không có ý nghĩa thống kê (p > 0,05), chứng tỏ thuốc nghiên cứu không làm ảnh hưởng đến trọng lượng cơ thể CNT. Đây là chỉ số quan trọng đánh giá thuốc mới khi nghiên cứu trường diễn.
Với mức liều BD1 đã sử dụng: không thấy có sự khác nhau có ý nghĩa thống kê về các mặt: l−ợng thức ăn tiêu thụ, l−ợng n−ớc uống tiêu thụ. Các biểu hiện về tập tính của động vật thực nghiệm về vận động và cảm giác không thấy có sự khác nhau giữa nhóm thử và nhóm chứng.
Khi phẫu thuật bóc tách các cơ quan (dạ dày, gan, lách, thận) quan sát
đại thể bằng mắt thường và quan sát dưới kính lúp ở độ phóng đại ì 25 lần không thấy có sự khác nhau ở niêm mạc dạ dày về màu sắc, hình thái. Màu sắc, thể chất của 3 tạng gan, lách, thận cũng không có sự khác biệt.
Kết quả định l−ợng: trọng l−ợng cơ thể khi cho động vật thí nghiệm uống tr−ờng diễn BD1 liều 0,40 g/kg đ−ợc trình bày ở bảng 65.
Bảng 65: Trọng l−ợng cơ thể CNT khi cho uống tr−ờng diễn BD1 liÒu 0,40 g/kg
Nhãm N/C Thêi gian
Trắng (1)
Chứng CMC 2% x 0,1 ml/10g
TLCT (2)
Thử BD1 0,40g/kg
TLCT (3)
n 10 10 10
Tuần thứ I x 18,16 18,40 18,68
SD 1,27 1,63 1,30
n 10 10 10
Tuần thứ II x 21,10 20,80 21,40
SD 2,40 2,24 2,14
N 10 10 10
Tuần thứ III x 23,01 22,60 23,14
SD 1,08 2,30 1,20
Tuần thứ IV n 10 10 10
x 24,18 24,60 25,12
SD 2,10 1,08 2,40
Tuần thứ V n 10 10 10
x 27,30 26,70 28,20
SD 1,97 1,20 1,42
p1,2 > 0,05
p2,3 > 0,05
p
p3,1 > 0,05
* Nhận xét: So sánh giữa các nhóm chứng, BD1 về các chỉ tiêu trọng l−ợng cơ thể, sự khác nhau không có ý nghĩa thống kê (p > 0,05).
Chế phẩm BD1 không làm ảnh hưởng đến trọng lượng cơ thể cũng như
trọng l−ợng các tạng quan trọng nhất của quá trình chuyển hóa thuốc và của quá trình thải trừ thuốc với 2 mức liều đã sử dụng là 0,30g/kg/24 giờ và 0,40g/kg/24 giờ trong 5 tuần liên tục.
b. Kết quả nghiên cứu trọng l−ợng cơ thể, trọng l−ợng gan, lách, thận và tỷ số giữa trọng l−ợng mỗi tạng so với trọng l−ợng cơ thể khi dùng mức liÒu 0,40 g/kg
Bảng 66: Kết quả nghiên cứu về trọng l−ợng cơ thể và trọng l−ợng các tạng của CNT ở mức liều 0,40 g/kgTLCT
Chỉ tiêu
Các tạng TLCT (g) TL tạng (g)
TL tạng/10g
TLCT
p
x 27,30 1,36
Chứng
SD 1,97 0,24 0,50 -
x 28,20 1,45
Gan (n=10)
BD1 SD 1,42 0,20 0,51 >0,05
x 27,30 0,18
Chứng
SD 1,97 0,02 6,59x10-2 -
x 28,20 0,17
Lách (n=10
BD1 SD 1,42 0,03 6,03x10-2 >0,05
x 27,30 0,42
Chứng
SD 1,97 0,01 0,154 -
x 28,20 0,44
ThËn (n=10)
BD1 SD 1,42 0,01 0,156 >0,05
* Nhận xét: ở mức liều đã sử dụng 0,40 g/kg TLCT động vật thực nghiệm BD1 không làm thay đổi các chỉ tiêu TLCT. So sánh giữa nhóm chứng – nhóm thử không có ý nghĩa thống kê.Nh− vậy khi dùng tr−ờng diễn BD1 không ảnh hưởng tới tốc độ tăng TLCT của CNT thí nghiệm.
c. ảnh hưởng của BD1 cho uống trường diễn đến các chỉ tiêu huyết học trên động vật thực nghiệm
* Với mức liều 0,40g/kg thể trọng cho dùng tr−ờng diễn trên thỏ, các thông số huyết học đ−ợc trình bày ở bảng 67.
Bảng 67: Các thông số huyết học khi dùng BD1cho uống tr−ờng diễn với mức liều 0,40g/kg TLCT thỏ
BD1 (n = 10) Chứng CMC (n= 10) Nhãm N/C
Chỉ tiêu N/C Tr−ớc thí nghiệm
Sau thÝ nghiệm
Tr−íc thÝ nghiệm
Sau thÝ nghiệm
Số l−ợng x 4,84 5,10 4.90 5,40
hồng cầu SD 1,20 1,10 0,84 1,30 (× 1012/L) p - > 0,05 - > 0,05
x 150,40 155,40 152.30 162,10
SD 24,80 23,20 20,41 20,10
Hemoglobin (g/L)
p - > 0,05 - > 0,05
x 2,44 2,52 2.60 2,82
SD 0,90 1,10 0,80 0,68
Bạch cầu (× 109/L)
p - > 0,05 - > 0,05
x 423,50 468,30 417.00 424,30 SD 120,70 90,70 60,78 60,30 TiÓu cÇu
(× 109/L)
p - > 0,05 - > 0,05
* Nhận xét: Với mức liều đã sử dụng (0,40 g/kg/24 giờ) uống trường diễn, đã không làm ảnh hưởng đến số lượng các tế bào máu động vật thực nghiệm (p > 0,05) BD1 không độc với chức năng tạo máu. Cả 3 dòng tế bào là hồng cầu, bạch cầu và tiểu cầu khi so sánh giữa nhóm chứng, nhóm BD1 sự thay đổi không có ý nghĩa thống kê (p > 0,05). Như vậy BD1 dùng trường diễn không độc với tế bào máu.
d. ảnh hưởng của BD1 đến các thông số hóa sinh trên thỏ khi cho uống tr−êng diÔn BD1
Các kết quả thu đ−ợc trình bày ở bảng 68.
Bảng 68: So sánh các chỉ tiêu hóa sinh về chức năng gan, thận của thỏ khi dùng BD1 tr−ờng diễn liều 0,40 g/kg/24 giờ
BD1 (n = 10) Chứng (n = 10) Nhãm N/C
Chỉ tiêu N/C Tr−ớc TN Sau TN Tr−ớc TN Sau TN
x 78,70 82,40 77,20 81,50
SD 16,01 14,20 12,17 14,28
SGOT (UI/L)
p - >0,05 - >0,05
x 58,20 54,24 50,40 56,20
SD 12,36 10,20 10,10 8,56
SGPT (UI/L)
p - >0,05 - >0,05
x 42,50 44,17 46,50 45,90
SD 8,02 9,30 6,68 10,20
Creatinin (àmol/L)
p - >0,05 - >0,05
* Nhận xét: Với mức liều đã sử dụng (0,40 g/kg TLCT thỏ), hoạt độ các enzym chuyển (trans) ở gan là SGOT và SGPT đều tăng nhẹ nh−ng sự khác biệt không có ý nghĩa thống kê (p > 0,05). Nh− vậy BD1 không làm ảnh h−ởng
đến chức năng gan. Hàm l−ợng creatinin không thay đổi rõ rệt (p>0,05). BD1 không ảnh hưởng đến chức năng thận.
e. ảnh hưởng của BD1 đến các thông số mô bệnh học khi dùng trường diễn Các kết quả trình bày trong bảng 69.
Bảng 69: Kết quả nghiên cứu về mô bệnh học của gan, lách, thận CNT khi dùng BD1 tr−ờng diễn liều 0,40 g/kg/24 giờ
Đặc điểm Lô BD1 Lô chứng
Mô gan
Màu sắc Màu nâu hồng, mô đồng nhất gan mềm mại
Màu nâu hồng, tổ chức gan
đều CÊu tróc tiÓu
thùy
Các tế bào gan sắp xếp thành bè, 2 hàng tế bào nhân tròn đều đặn
Các tế bào ganbình th−ờng
Tế bào gan Bình th−ờng Bình th−ờng
Mạch máu Các mạch máu nan hoa, mạch máu vùng khoảng cửa bình th−êng
B×nh th−êng
CÊu tróc khoảng cửa
Không giãn rộng Bình th−ờng
Các tổn th−ơng Không quan sát thấy Không quan sát thấy Kết luận Mô gan có cấu trúc vi thể bình
th−êng
Tổ chức gan bình th−ờng Mô lách
Màu sắc Đỏ t−ơi Đỏ t−ơi
Cấu trúc tiêu thÓ Malpzi
Rõ ràng Rõ ràng
Mạch máu Bình th−ờng Bình th−ờng
CÈu tróc xoang B×nh th−êng B×nh th−êng
Các tổn th−ơng Không quan sát thấy Không quan sát thấy
Kết luận Cấu trúc mô lách bình th−ờng Cấu trúc mô lách bình th−ờng Mô thận
Máu sắc Màu nâu nhạt, 2 thận đều nhau Màu nâu nhạt, 2 thận đều nhau
Cấu trúc vỏ Rõ ràng Rõ ràng
CÊu tróc tuû Cã ranh giíi râ Cã ranh giíi râ Cầu thận Cấu trúc bình th−òng Bình th−ờng
èng thËn B×nh th−êng B×nh th−êng Các tổn th−ơng Không thấy Không thấy
* Nhận xét: Với mức liều đã dùng (0,40g/kg thể trọng) dùng uống trường diễn, trên động vật thực nghiệm không thấy tổn thương gan, thận, lách.
Hình thái gan, thận, lách của nhóm chứng so với nhóm thuốc không có sự khác biệt gì đáng kể. Thuốc không độc với gan, lách, thận về góc độ mô bệnh học.
5.2.3. KÕt luËn
Từ các kết quả thu đ−ợc trên thực nghiệm, chúng tôi sơ bộ kết luận về
độ an toàn của BD1
- BD1 có độc tính cấp diễn, theo đường uống, trên chuột nhắt trắng là 10,84 ± 1,18 g/kg TLCT.
Như vậy BD1 có độc tính cấp tương đối thấp. Nói một cách khác BD1 dùng đường uống tương đối ít độc.
- BD1 khi dùng tr−ờng diễn
• Không ảnh hưởng đến trọng lượng cơ thể cũng như trọng lượng các cơ
quan gan, lách, thận.
• Không độc với tế bào máu.
• Không làm ảnh hưởng đến chức năng gan, thận.
• Không gây tổn thương ở gan, thận, lách động vật thực nghiệm về mặt hình thái mô bệnh học.