b. Thông tin chi tiết của một số môi trường compact dry
compact Dry EC (Escherichia coli và Coliform):
Đĩa môi trường đông khô chuẩn bị sẵn để kiểm E.coli và Coliform
Áp dụng cho các loại nền mẫu: rắn (thịt, tôm cá, trứng, thức ăn chăn nuôi), sữa (sữa bột, sữa lỏng), nước (trực tiếp hoặc màng lọc).
Thời gian ủ: 24±2 giờ Nhiệt độ ủ: 35±2℃ Hình dạng khuẩn lạc:
E.coli: khuẩn lạc màu xanh, xanh tím Coliform: tất cả khuẩn lạc màu đỏ và xanh
Compact Dry SL (Salmonella):
Đĩa môi trường đông khô chuẩn bị sẵn để kiểm Salmonella
Áp dụng cho các loại nền mẫu: rắn (thịt, tôm cá, trứng, thức ăn chăn nuôi), sữa (sữa bột, sữa lỏng), nước (trực tiếp hoặc màng lọc).
Đạt các chứng nhận: đang submit chứng nhận AOAC RI Thời gian ủ: 20 -24 hours
Nhiệt độ ủ: 35 – 37℃
Hình dạng khuẩn lạc: màu xanh lá
Compact Dry X-SA (Staphylococcus aureus):
Đĩa môi trường đông khô chuẩn bị sẵn để kiểm Staphylococcus aureus (không cần test khẳng định)
Áp dụng cho các loại nền mẫu: rắn (thịt, tôm cá, trứng, thức ăn chăn nuôi), sữa (sữa bột, sữa lỏng), nước (trực tiếp hoặc màng lọc).
Đạt các chứng nhận: AOAC RI, MicroVal, NordVal Thời gian ủ: 24±2 giờ
Nhiệt độ ủ: 35±2℃
Hình dạng khuẩn lạc: khuẩn lạc màu xanh nhạt
Đĩa môi trường đông khô chuẩn bị sẵn để kiểm Bacillus cereus
Áp dụng cho các loại nền mẫu: rắn (thịt, tôm cá, trứng, thức ăn chăn nuôi), sữa (sữa bột, sữa lỏng), nước (trực tiếp hoặc màng lọc).
Đạt các chứng nhận: MicroVal, NordVal Thời gian ủ: 24 giờ
Nhiệt độ ủ: 30℃
Hình dạng khuẩn lạc: khuẩn lạc màu xanh
1.5. Giới thiệu phương pháp thí nghiệm trên động vật
Thử nghiệm động vật (Animal testing) hay cịn được gọi là thí nghiệm trên động vật, nghiên cứu động vật (animal research) và thử nghiệm in vivo là việc sử dụng các lồi động vật (khơng phải là con người) trong các thí nghiệm nhằm kiểm sốt các biến tố ảnh hưởng đến hành vi hoặc hệ thống sinh học đang được nghiên cứu, những động vật được chọn thí nghiệm gọi là sinh vật mơ hình. Cách tiếp cận này có thể tương phản với các nghiên cứu hiện trường, trong đó những động vật được quan sát thấy trong môi trường tự nhiên của chúng.
Các nghiên cứu thử nghiệm với động vật thường được tiến hành tại các trường đại học, các trường y, các công ty dược phẩm, các cơ sở quốc phòng và các cơ sở thương mại cung cấp các dịch vụ kiểm tra động vật cho ngành công nghiệp. Trọng tâm của việc thử nghiệm trên động vật thay đổi liên tục từ nghiên cứu thuần túy, tập trung vào việc phát triển kiến thức căn bản về sinh vật, nghiên cứu ứng dụng, có thể tập trung trả lời một số vấn đề có tầm quan trọng thực tiễn lớn đặt ra, chẳng hạn như tìm ra phương pháp chữa bệnh. Các ví dụ về nghiên cứu ứng dụng bao gồm các thử nghiệm điều trị bệnh, chăn ni, nghiên cứu quốc phịng và độc tính, bao gồm cả kiểm tra mỹ phẩm (Thử nghiệm mỹ phẩm trên động vật).
Chuột nhắt, chuột cống, cá, lưỡng cư và bò sát cùng chiếm hơn 85% số động vật nghiên cứu, trong đó chuột cũng như các lồi gặm nhấm là những động vật được chọn
làm vật thí nghiệm nhiều vì tính sẵn có, chi phí thấp, giá thành rẻ, sinh sơi nhanh và có nhiều điểm tương đồng với con người. Hầu hết các động vật đều bị giết chết sau khi được sử dụng thử nghiệm tránh việc thất thoát ra bên ngồi. Nguồn động vật thí nghiệm khác nhau giữa các nước và lồi; hầu hết động vật thí nghiệm được nhân giống sinh sản có mục đich tại các trung tâm nghiên cứu.
1.5.1. Thử nghiệm in vivo
In vivo trong tiếng Latin có nghĩa là q trình diễn ra trong cơ thể sống. Phương
pháp in vivo được dùng để chỉ những thí nghiệm dùng các mơ sống hay toàn bộ cơ thể còn sống làm đối tượng thử nghiệm. Các phương pháp in vivo khác với in vitro (thí
nghiệm ngồi cơ thể sống, thử nghiệm trong ống nghiệm) và các thí nghiệm trên các mơ hay cơ thể đã chết. Thơng thường, khi nói đến in vivo, người ta thường nghĩ đến các thí nghiệm, thử nghiệm trên đối tượng là sinh vật sống. Các thí nghiệm sử dụng động vật hay các thử nghiệm lâm sàng trên người là ví dụ của nghiên cứu in vivo.
Christopher Lipinksi và Andrew Hopkins cho rằng dù thử nghiệm trên cơ thể sống để tìm kiếm các loại dược phẩm mới hay có thêm hiểu biết về cơ thể sinh vật vẫn phải đồng thời xem xét những cơng cụ hóa học và bản chất hóa học của đối tượng sinh vật. Thực tế cho thấy một hợp chất nào đó biểu hiện hoạt tính khi được thử nghiệm ngoài cơ thể sống (in vitro) như khả năng kết hợp với protein tái tổ hợp, thay đổi quá trình trao đổi chất tế bào hay thậm chí phá vỡ cấu trúc tế bào đã được phân lập... nhưng chưa chắc đã có hoạt tính mong muốn khi thử nghiệm trên cơ thể sống. Chính vì vậy thử nghiệm
in vivo vẫn được coi là bước thử nghiệm chắc chắn nhất sau khi các phương pháp in vitro đã được tiến hành.
Phương pháp in vivo sử dụng động vật thí nghiệm gặp phải sự phản đối của những cá nhân và tổ chức bảo vệ quyền động vật (animal rights). Mặc dù các cơ quan khoa học đều có các biện pháp kiểm duyệt chặt chẽ những quy trình thí nghiệm nhưng các vấn đề thuộc đạo đức sinh học ngày càng được quan tâm và gây nhiều tranh cãi. Đôi khi ta thấy những cuộc phản đối việc dùng động vật trong nghiên cứu ở các nước phát triển. Hiện
tại, khi chưa có phương pháp thay thế, người ta cân nhắc nguyên tắc 3R (reduce, refinement, replacement) trong các thí nghiệm dùng động vật. Trong đó:
- Reduce (giảm): hạn chế số lượng động vật được sử dụng trong mỗi thí nghiệm mà vẫn thu được những thông tin cần thiết,
- Refinement (đối xử tinh tế): rèn luyện kỹ thuật tốt và ứng dụng kiến thức về động vật học nói chung và lồi vật được dùng trong từng thí nghiệm cụ thể để tránh gây stress, tránh gây kích thích.
- Replacement (thay thế): dùng phương pháp khác (nếu có thể) để tránh dùng động vật cho thí nghiệm.
Nguyên tắc này được William Russell (nhà động vật học) và Rex Burch (nhà nghiên cứu vi sinh vật) giới thiệu lần đầu tiên vào năm 1959 và còn nguyên ý nghĩa cho đến ngày nay.
Bước thử nghiệm cuối cùng (thử nghiệm lâm sàng, clinical trials) được tiến hành trên người (đối tượng được lựa chọn tùy thuộc vào từng thử nghiệm). Bước này chỉ có thể được tiến hành khi các phương pháp thí nghiệm trước đó, về cơ bản, cung cấp đủ bằng chứng về tính an tồn của loại chế phẩm đang nghiên cứu. Các giai đoạn và quy mô thử nghiệm cũng tùy thuộc vào từng loại chế phẩm. Có những thử nghiệm lâm sàng khơng những khơng đem lại kết quả mong muốn mà cịn đem lại nhiều tranh cãi về tác dụng của phương pháp điều trị và đạo đức y học. Thử nghiệm quy mô của liệu pháp thay thế hormone là một ví dụ.
Trong sinh học phân tử, thuật ngữ in vivo thường được sử dụng (nhưng thực chất là không chính xác) để chỉ những nghiên cứu trên các tế bào đã được phân lập (isolated cells). Phương pháp này được gọi với tên thích hợp là "ex vivo".
Thí nghiệm in vivo được dùng trong các nghiên cứu di truyền học, sinh học phát triển, nghiên cứu y sinh học, ghép tạng, độc chất học, phát triển dược phẩm, mỹ phẩm,… Nhiều loại động vật (từ động vật khơng xương sống đến các lồi linh trưởng) được sử dụng trong nghiên cứu. Người ta ước tính khoảng 50 đến 100 triệu động vật có xương
sống được dùng cho các thí nghiệm hàng năm. Các loại động vật có xương sống được sử dụng phổ biến hiện nay là các lồi gặm nhấm (chuột, chuột nhắt, thỏ...), chó, mèo, lợn, các lồi linh trưởng.
1.5.2. Thử nghiệm mỹ phẩm trên động vật
Phương pháp thử nghiệm mỹ phẩm trên động vật bao gồm nhiều thử nghiệm khác nhau được phân loại dựa trên những lĩnh vực mà mỹ phẩm sẽ được sử dụng. Một số phương pháp thử nghiệm.
Kích ứng da: đây là phương pháp xác định xem hóa chất có gây ra phản ứng dị ứng hay khơng. Chất bổ trợ hóa học được tiêm để tăng cường hệ thống miễn dịch. Trong quá khứ, nó đã được thực hiện trên chuột lang, và được áp dụng trên một mảng da đã làm sạch lông. Các chất được đánh giá dựa vào biểu hiện trên bề mặt da
Độc tính cấp tính: thử nghiệm này được sử dụng để xác định nguy cơ tiếp xúc với hóa chất qua đường miệng, da hoặc tình trạng viêm. Chuột cống và chuột nhắt được tiêm liều gây chết 50% (LD50). Thử nghiệm này có thể khiến con vật bị co giật, mất chức năng vận động và chết.
Thử nghiệm Draize: đây là một phương pháp thử nghiệm có thể gây kích ứng hoặc ăn mòn da hoặc mắt động vật, mẫn cảm da, nhạy cảm đường thở, rối loạn nội tiết và LD50 (dùng để chỉ liều gây chết 50% số động vật được điều trị ).
Độ ăn mịn hoặc kích ứng da: phương pháp kiểm tra này đánh giá khả năng của một chất gây ra tổn thương không thể phục hồi cho da. Nó thường được thực hiện trên thỏ và bao gồm việc bơi hóa chất lên một mảng da đã làm sạch lông. Điều này quyết định mức độ tổn thương của da bao gồm ngứa, viêm, sưng tấy,…
Các nhà sản xuất mỹ phẩm khơng thử nghiệm trên động vật hiện có thể sử dụng màn hình in vitro để kiểm tra các điểm cuối có thể xác định nguy cơ tiềm ẩn đối với con người với độ nhạy và độ đặc hiệu rất cao. Các công ty như CeeTox ở Hoa Kỳ, được Cyprotex mua lại gần đây, chuyên về thử nghiệm như vậy và các tổ chức như Trung tâm Thử nghiệm Thay thế cho Động vật (CAAT), PETA và nhiều tổ chức khác ủng hộ việc
sử dụng các thử nghiệm in vitro và các thử nghiệm không phải động vật khác trong phát triển các sản phẩm tiêu dùng. Bằng cách sử dụng các thành phần an toàn từ danh sách đã được thử nghiệm kết hợp với các phương pháp thử nghiệm mỹ phẩm hiện đại, nhu cầu thử nghiệm sử dụng động vật đã bị phủ nhận.
Mặt khác, động vật có thể trưởng thành nhanh chóng. Ví dụ, lồi chuột có tốc độ phát triển nhanh hơn nhiều "Từ khi sinh ra đến khi trưởng thành, chuột mất khoảng ba tuần để trưởng thành và bắt đầu tự kiếm mồi. Loài gặm nhấm này đạt đến thời kỳ trưởng thành về mặt sinh dục trong khoảng năm tuần và bắt đầu giao phối ngay sau đó để tạo ra thế hệ tiếp theo bắt đầu lại vịng đời của chuột ”. Ngồi thời gian cực kỳ ngắn cần một con chuột trưởng thành, chúng có thể cung cấp cho chúng ta một bộ hệ thống cơ quan hồn chỉnh chứ khơng chỉ là một tờ tế bào mỏng như tờ giấy. Chuột cũng có thể sinh sản với tốc độ rất nhanh (chuột sinh sản khoảng 7 con một lứa và có khả năng sinh đến 14 con một lứa, Thời gian mang thai chỉ kéo dài vài tuần, cho phép mỗi con chuột cái sinh sản khoảng 8 lứa một năm).
EpiSkin ™, EpiDerm ™ và SkinEthic đều được cấu tạo từ da người nhân tạo như một lựa chọn để thử nghiệm thay thế. Da nhân tạo có thể bắt chước phản ứng của da người thực tế với một sản phẩm và các hóa chất mà nó chứa và có thể được thay đổi để bắt chước các loại da và độ tuổi khác nhau. Ví dụ, sử dụng tia UV trên EpiSkin có thể khiến da giống với da cũ hơn và việc thêm tế bào hắc tố sẽ khiến da có màu tối hơn. Điều này đã giúp tạo ra một phổ các màu da khác nhau, sau đó được sử dụng để so sánh kết quả của kem chống nắng trên nhiều người khác nhau. Để giải quyết các vấn đề tiềm ẩn với các bộ phận khác của cơ thể con người, các công ty nghiên cứu như NOTOX đã phát triển một mơ hình tổng hợp của gan người, đây là cơ quan chính để giải độc cơ thể, nhằm kiểm tra các thành phần và hóa chất có hại để xem gan có thể giải độc các yếu tố đó. các cơng ty nghiên cứu cũng có thể sử dụng các bộ phận cơ thể và nội tạng lấy từ động vật bị giết mổ cho ngành công nghiệp thịt để thực hiện các bài kiểm tra như Kiểm tra độ mờ và thấm giác mạc của bị và kiểm tra mắt gà cơ lập.
Các mô được nuôi trong phịng thí nghiệm hiện đang được sử dụng để kiểm tra hóa chất trong các sản phẩm trang điểm. MatTek là một trong những công ty làm được điều
này. Nó bán một lượng nhỏ tế bào da cho các công ty để thử nghiệm sản phẩm của họ trên đó. Một trong những cơng ty này là những cơng ty sản xuất đồ trang điểm, chất tẩy rửa, kem chống lão hóa và kem dưỡng da. Nếu khơng có những mơ này, các cơng ty sẽ thử nghiệm sản phẩm của họ trên động vật sống. Các mô được trồng trong phịng thí nghiệm là một giải pháp thay thế tuyệt vời để thử nghiệm các sản phẩm có hại trên động vật
1.6. Sắc ký ghép khí khối phổ GC–MS/ GAS Chromatography mass spectrometry) và một số ứng dụng và một số ứng dụng
Sắc ký khí ghép khối phổ (GC-MS/ Gas Chromatography Mass Spectometry) là một trong những phương pháp sắc ký hiện đại nhất hiện nay với độ nhạy và độ đặc hiệu cao và được sử dụng trong các nghiên cứu và phân tích kết hợp. Thiết bị GC-MS được cấu tạo thành 2 phần: phần sắc ký khí (GC) dùng để phân tích hỗn hợp các chất và tìm ra chất cần phân tích, phần khối phổ (MS) mơ tả các hợp phần riêng lẻ bằng cách mô tả số khối. Bằng sự kết hợp 2 kỹ thuật này (GC-MS/ Gas Chromatography Mass Spectometry), các nhà hố học có thể đánh giá, phân tích định tính và định lượng và có cách giải quyết đối với một số hóa chất. Ngày nay, người ta ứng dụng kỹ thuật GC-MS rất nhiều và sử dụng rộng rãi trong các nghành như y học, môi trường, nông sản, kiểm nghiệm thực phẩm…\
1.6.1. Sắc ký khí (GC-Gas chromatography)
Sắc ký khí được dùng để chia tách các hỗn hợp của hóa chất ra các phần riêng lẻ, mỗi phần có một giá trị riêng biệt. Trong sắc ký khí (GC) chia tách xuất hiện khi mẫu bơm vào pha động. Trong sắc ký lỏng (LC) pha động là một dung mơi hữu cơ, cịn trong GC pha động là một khí trơ gống như Helium. Pha động mang hỗn hợp mẫu đi qua pha tĩnh, pha tĩnh được sử dụng là các hóa chất, hóa chất này có độ nhạy và hấp thụ thành phần hỗn hợp trong mẫu.
Thành phần hỗn hợp trong pha động tương tác với pha tĩnh, mỗi hợp chất trong hỗn hợp tương tác với một tỷ lệ khác nhau, hợp chất tương tác nhanh sẽ thoát ra khỏi cột trước và hợp chất tương tác chậm sẽ ra khỏi cột sau. Đó là đặc trưng cơ bản của pha động và pha tĩnh, hơn nữa q trình chia tách có thể xảy ra bởi sự thay đổi nhiệt độ của pha tĩnh hoặc là áp suất của pha động.
Cột trong GC được làm bằng thủy tinh, inox hoặc thép khơng rỉ có kích thước, kích cỡ rất đa dạng. Cột của GC dài có thể là 25 m, 30 m, 50 m, 100 m và có đường kính rất nhỏ, bên trong đường kính được tránh bằng một lớp polimer đặc biệt như phenyl 5% + dimetylsiloxane polymer 95%), đường kính cột thường rất nhỏ giống như là một ống mao dẫn. Thông thường cột được sử dụng là semivolatile, hợp chất hữu cơ không phân cực như PAHs, các chất trong hỗn hợp được phân tích bằng cách chạy dọc theo cột này. Một chất chia tách, rửa giải phóng đi ra khỏi cột và đi vào đầu dò. Đầu dị có khả năng tạo ra một tín hiệu bất kỳ lúc nào, khi phát hiện ra chất cần phân tích. Tín hiệu này phát ra từ máy tính, thời gian từ khi bơm mẫu đến khi rửa giải gọi là thời gian lưu (TR). Trong khi các thiết bị chạy, máy sẽ đưa ra các biểu đồ từ các tín hiệu. Đây gọi là sắc đồ, mỗi một peak trong sắc đồ sẽ miêu tả một tín hiệu tạo nên khi chất giải hấp từ cột sắc ký và đi vào đầu dị Detector, trục hồnh biểu diễn thời gian lưu và trục tung biểu diễn cường độ của tín hiệu, trong hình mỗi đỉnh (peak) biểu diễn một chất riêng lẻ, chất này được tách từ hỗn hợp mẫu phân tích, peak có thời gian lưu (TR) 4,97 phút là dodecane; 6,36 phút là biphenyl; 7,64 phút là chlolobiphenyl; 9,41 phút là hexadecanoic