Theo nguyên tắc, làm việc trên 1 yếu tố thí nghiệm còn cố định các yếu tố còn lại, kết quả tốt nhất của thí nghiệm trước được rút ra làm thông số cho các thí nghiệm tiếp theo. Các thí nghiệm được nhắc lại 3 lần. Chỉ tiêu đánh giá là hàm lượng polyphenol tổng số trong dịch chiết (tiến hành phản ứng và phép đo quang phổ theo TCVN 9745-1-2013).
Từ các công trình nghiên cứu trước, chúng tôi tiến hành chiết tách polyphenol bằng dung môi ethanol theo quy trình được trình bày ởsơ đồ (2.1) như sau:
Rửa, diệt enzym, Nghiền nhỏ Nồng độ dung môi Thời gian chiết Khảo sát các điều kiện chiết Tỉ lệ NL:DM Nhiệt độ PH Cô quay
Sấy thăng hoa
Lá chè Định tính Thuốc thử và TLC Cao chiết lá chè Dịch chiết lá chè Xác định hàm lượng polyphenol tổng Bột chè Ứng dụng Bột chiết lá chè
Quy trình được thực hiện các bước cụ thểnhư sau:
- Bước 1: Thu hái lá chè xanh trực tiếp tại vườn, xửlý thu được bột chè có độẩm 3-
5%, kích thước 0,5-1 mm.
Hình 2. 1: Lá chè sau khi xử lý
- Bước 2: Tiến hành khảo sát chiết tách polyphenol, tối ưu hóa các yếu tố công nghệ như sau:
a) Ảnh hưởng của nồng độ dung môi
Thí nghiệm được tiến hành với dung môi ethanol, nhiệt độ trích ly: 65 oC, thời gian trích ly 35 phút, trích ly 1 lần, tỷ lệ nguyên liệu/dung môi là 1/25.
Nồng độethanol được khảo sát 45; 50; 55; 60; 65; 70; 75; 96%. b) Ảnh hưởng của thời gian chiết
Thời gian trích ly được khảo sát trong khoảng từ 20; 25; 30; 35; 40; 45; 50; 55 phút. c) Ảnh hưởng của tỷ lệ nguyên liệu/dung môi
Thí nghiệm được khảo sát với các tỷ lệ nguyên liệu/dung môi là 1:15; 1:20; 1:25; 1:30; 1:40; 1:50; 1:60.
d) Ảnh hưởng của nhiệt độ trích ly
Nhiệt độtrích ly được khảo sát trong khoảng từ 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80 0C. e) Ảnh hưởng của pH
Chúng tôi tiến hành khảo sát ảnh hưởng của pH bằng cách điều chỉnh độ pH bằng axit citric và natri hidro cacbonat. Với mẫu đối chứng là dung môi ethanol chưa có sự điều chỉnh pH có độ pH = 4,3.
Hình 2. 2: Thiết bị chiết tách
- Bước 3: Dịch chiết thu được đo hàm lượng Polyphenol tổng bằng phương pháp
Folin-Denis thu được điều kiện tối ưu.
Hình 2. 3: Mẫu đo UV - VIS
- Bước 4: Dịch chiết thu được mang đi cô quay chân không thu được cao chiết lá
chè ở điều kiện tối ưu để Định tính bằng thuốc thử và Sắc ký lớp mỏng. Thử hoạt tính oxy hóa và hoạt tính kháng khuẩn.