V: thể tích anthocyanin thu được
3.KẾT LUẬN VÀ THẢO LUẬN
3.1. Kết quả xác định hàm lượng anthocyanin
Hình 1. Màu sắc hạt gạo của 20 mẫu giống lúa cẩm nghiên cứu
Tên chỉ
thị Trình tự mồi xuôi Trình tự mồi ngược Nguồn tham khảo
Sản phẩm PCR dự kiến
Rc 5'atcagtccaggcaccaca3' 5'ccaaagatcgcagaattatga3' Sweeney và nnk., 2006 229 bp
qPC7 5'gtggacctacagcctcct3' 5'ctgcatcaccgtcgactt3' Gu và nnk., 2011 431 bp
468
Hình 2. Hàm lượng anthocyanin 20 mẫu giống lúa cẩm.
(Giống IR24 có hàm lượng bằng 0)
Kết quả đo hàm lượng anthocyanin trên 20 giống mẫu lúa: các mẫu giống lúa cẩm khác nhau có hàm lượng anthocyanin không giống nhau, được chia làm 3 nhóm: (i) nhóm 1 có hàm lượng thấp (<100 mg/ 100g) gồm các mẫu giống N19, N24, N25, N27, N29, N31, N37, N38 và N39; (ii) nhóm 2 có hàm lượng trung bình (từ 100 đến 200mg/ 100g) gồm các mẫu giống N15, N17, N21, N23, N26, N32, N33; (iii) nhóm 3 có hàm lượng cao (>200mg/100g) gồm các mẫu giống N16, N18, N20, N22.
Có sự chênh lệch hàm lượng giữa mẫu giống có hàm lượng anthocyanin cao nhất (N20 có nội nhũ hạt gạo màu cẩm đen; 379mg/100g) với mẫu giống có hàm lượng anthocyanin thấp nhất (N25 có nội nhũ hạt gạo màu nâu đỏ, 2mg/100g).
3.2. Kết quả xác định gen Rc quy định tổng hợp anthocyanin bằng chỉ thị DNA
Để xác định được DNA chỉ thị nào phát hiện gen Rc rõ nhất đơn giản mà chính xác nhất, chúng tôi so sánh kết quả PCR của 3 chỉ thị DNA trên 4 mẫu giống nghiên cứu N16, N20, N25, N37 và IR24. Kết quả trên hình 3a cho thấy chỉ thị qPC7 nhân được một băng ~ 431bp ở cả 4 mẫu DNA lúa cẩm đúng theo thông tin từ công bố của Gu và nnk (2011) [6]. Mẫu IR24 không có sản phẩm.
Hình 3b với chỉ thị Rc nhân được băng sản phẩm PCR ~ 229bp ở cả 6 mẫu DNA lúa cẩm, không có ở IR24 và kết quả có thêm một băng DNA ~ 300bp chưa xác định ở cả IR24, NC2013, N16, N40, N25, N37 nhưng không có ở N20.
Hình 3c cho kết quả PCR không rõ nét khi sử dụng chỉ thị RM21197, băng DNA khuếch đại không đúng kích thước 250bp như công bố của Gu và nnk (2011) [6]. Mẫu IR24 không có sản phẩm PCR.
Như vậy, chỉ thị qPC7 có khả năng ứng dụng cao và được chọn để xác định gen Rc cho 20 mẫu giống ở thí nghiệm tiếp theo.
469
Hình 3. Kết quả PCR sàng lọc khả năng ứng dụng của 4 chỉ thị phân tử DNA