- Ảnh hưởng của môi trường khoáng thích hợp cho tạo đa chồi Kim tuyến đá vô i:
2.3.2.Vật liệu nghiên cứu
Mẫu ba kích in vitro được lấy từ trường đại học Lâm Nghiệp Việt Nam.
Môi trường MS (Murashige và Skoog, 1962), chất điều hòa sinh trưởng thuộc nhóm cytokinin (BA, KIN), nhóm auxin (IBA, NAA), các vitamin: (MS, riboflavin), đường sucrose, agar.
2.3.3. Phương pháp nghiên cứu
Môi trường Murashige- Skoog (MS) (1962) có bổ sung nồng độ BA (N6-
Benzyladenine), IBA ( 3-Indolebutyric acid ) ở các mức khác nhau cùng với thành phần cơ bản:7g/l agar, 30 g/l đường. Chất phụ gia có 10mg/l riboflavine, than hoạt tính ở các khối lượng khác nhau tuỳ vào loại môi trường; pH 5,8 được dùng làm môi trường nuôi cấy cơ bản cho các thí nghiệm (TN) nuôi cấy in vitro. Phương pháp bố trí cho từng thí nghiệm như mô tả dưới đây.
Thí nghiệm 1: Khảo sát nồng độBA (N6-Benzyladenine) ảnh hưởng tới khả năng tạo
chồi của cây ba kích. Đoạn thân có 1 mắt lá được tách ra từ chồi của nuôi cấy in vitro sẽ được
nuôi cấy trên môi trường MS có bổ sung 10mg/l riboflavine và 0,1mg/l IBA kết hợp với BA ở 8 nồng độ khác nhau (0,5; 1,0 1,5; 2,0; 2,5; 3,0; 3,5 và 4mg/l). Thí nghiệm có 8 nghiệm thức với 3 lần lặp lại, mỗi lần lặp lại gồm 4 bình, mỗi bình cấy 8 chồi. Thí nghiệm được thực hiện trong bình thủy tinh loại 500ml với thể tích môi trường là 50ml. Môi trường bổ sung 30g/l sucrose và 7 g/l agar, pH=5,8, hấp khử trùng ở 1210C, 1 atm trong 20 phút. Điều kiện nhiệt độ phòng nuôi cấy là 250C, chu kỳ chiếu sáng 10 giờ/ngày, cường độ chiếu sáng 2000 lux.
Thí nghiệm 2: Khảo sát sự hình thành rễ của cây ba kích. Những mẫu chồi khoẻ
mạnh, mập mạp, có chiều cao trung bình từ 1,7 – 3 cm cấy chuyền sang môi trường MS có bổ sung IBA hoặc NAA với 4 nồng độ khác nhau là 0,1; 0,2; 0,3 và 0,4 mg/l nhằm kích thích tạo rễ.Thí nghiệm được bố trí hoàn toàn ngẫu nhiên với ba lần lập lại, mỗi lần cấy 4 bình, mỗi bình cấy 8 chồi.