, Trần Thị Hiền1 Nguyễn Thị Thu Phương 1 Nguyễn Thị Xuyến
3.1.Ảnh hưởng của thời gian khử trung bằng Javel (NaOCl) đến mẫu cấy
3. KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN
3.1.Ảnh hưởng của thời gian khử trung bằng Javel (NaOCl) đến mẫu cấy
Tỉ lệ vô trùng thành công phụ thuộc vào thời gian khử trùng và nồng độ các chất khử trùng. Năm 2002, Estrela và ctv đưa ra nhận định khi javel (NaClO) tan trong nước sẽ có phản ứng cân bằng qua lại theo phương trình: NaOCl + H2O NaOH + HClO + Na+ + OH- + H+ + OCl-
HClO và OCl- là những chất làm biến tính và thủy phân amino acid. Ngoài ra, NaOCl còn hòa tan chất béo tạo ra các các acid béo và chuyển chúng thành muối acid béo và glycerol nhờ phản ứng xà phòng hóa dẫn đến gây chết cho tế bào vi sinh vật.
Bảng 1. Ảnh hưởng của javel (NaOCl) đến tỉ lệ sống và sạch của mẫu lan Dendrobium
Caesar White và Dendrobium Uraiwan
Môi trường Thời gian khử trùng (phút) Tỉ lệ mẫu sống và sạch (%) Dendrobium
Uraiwan Dendrobium Caesar White
MS 10 38,89b 44,44c MS 15 55,56ab 55,56bc MS 20 72,22a 77,78a MS 25 66,67a 72,22ab MS 30 55,56ab 61,11abc CV (%) 10,54 11,29
Các ký tự khác nhau theo sau các giá trị trung bình trong cùng một cột thể hiện sự khác biệt có ý nghĩa về mặt thống kê ở mức p < 0,01ở giống Dendrobium Uraiwan và 0,01 < p < 0,05 ở giống Dendrobium Caesar White. Số liệu chuyển đổi theo đổi theo công thức y=arcsin với x là số phần trăm mẫu còn sống và sạch của một nghiệm thức trong một lần lặp
lại.
Clorua thủy ngân là chất khử trùng có chứa kim loại nặng, ảnh hưởng trực tiếp đến hệ enzyme của vi sinh vật. Chính vì vậy, khi kết hợp hai chất khử trùng này lại cho hiệu quả khử trùng mẫu rất tốt, đặc biệt kết quả tốt nhất khi sử dụng javel 30% trong 20 phút và HgCl2 trong 2 phút. Khi khử trùng càng lâu thì càng nhiều vi sinh vật trên bề mặt mẫu cấy bị tiêu diệt, đồng thời dưới tác động của Tween 80 làm giảm sức căng bề mặt của nước, tăng khả năng tiếp xúc của javel với mẫu cấy, hơn nữa chất khử trùng có đủ thời gian để len lõi vào sâu
420
bên trong các kẽ chồi, đẩy các bọt khí ra ngoài. Tuy nhiên việc khử trùng mẫu cấy trong thời gian dài, javel sẽ phá vỡ các thành phần của tế bào thực vật nhất là diệp lục tố, sức sống của mẫu càng khó được phục hồi khi số tế bào bị ảnh hưởng càng nhiều. Do đó, theo kết quả ở bảng 1, thời gian khử trùng hợp lý nhất là 20 phút với javel ở nồng độ 30% cho cả 2 giống.