C 77 H34 H34 H195 H195 A15 A15 A16 A16 A41 A41 D A56 A56 B186 B186 B208 B208 16 16 17 17 18
3.2.1. Đánh giá độ tinh sạch của ADN
Sản phẩm ADN tách chiết được điện di kiểm tra trên gel agarose 1%.
Qua ảnh điện di ADN tổng số của 8 mẫu khoai tây, ta thấy cả 8 mẫu đều xuất hiện 1băng ADN chứa ADN tổng số và ADN bịđứt gãy rất ít. Như vậy ADN tổng số của 8 dịng nghiên cứu đáp ứng được yêu cầu của các thí nghiệm tiếp theo.
10
Hình 3: ADN của 8 mẫu khoai tây nghiên cứu 3.2.2. Kết quả phản ứng PCR
Kết quả phản ứng PCR được thể hiện ở sự xuất hiện các băng ADN trên bản gel
điện di. Mỗi đoạn ADN được nhân lên sẽ cho 1 vạch cĩ vị trí nhất định trên bản gel. Các mồi khác nhau đã cho kết quả các vạch băng nhân lên khác nhau được thể hiện qua bảng 6.
Hình ảnh điện di sản phẩm PCR được minh họa ở hình 4. Qua kết quả phản ứng PCR ta thấy:
- Khi sử dụng mồi GM339, những dịng khoai tây cĩ đoạn ADN được nhân lên với kích thước 330bp, đúng như kích thước của đoạn ADN liên kết chặt với gen Nb - gen kháng virus PVX là những dịng cĩ chứa gen Nb. Trong 8 dịng khoai tây nhị bội nghiên cứu cĩ 6 dịng cĩ chứa gen Nb và như vậy cĩ khả năng kháng virus PVX, đĩ là: H1959/195, A15, A41, A56, B186, B208.
- Khi sử dụng mồi GM339, những dịng khoai tây cĩ đoạn ADN được nhân lên với kích thước 111bp, đúng như kích thước của đoạn ADN liên kết chặt với gen Rysto - gen kháng virus PVY là những dịng cĩ chứa gen Rysto. Trong 8 dịng khoai tây nhị bội nghiên cứu cĩ 6 dịng cĩ chứa gen Rysto và như vậy cĩ khả năng kháng virus PVY, đĩ là: A15, A16, A41, A56, B186, B208.
So sánh với kết quả lây nhiễm nhân tạo thì 6 dịng cĩ chứa gen kháng virus PVY
đều biểu hiện khả năng kháng khi lây nhiễm nhân tạo. Tuy nhiên cĩ 2 dịng là H1959/195 H195 A15 A16 A41 A56 B186 B208 H34
11
và H1959/34 cũng cĩ biểu hiện kháng virus PVY khi lây nhiễm nhân tạo nhưng lại khơng chứa gen kháng virus PVY.
Bảng 6: Số lượng các băng ADN nhân được của các mồi với mỗi dịng khoai tây nhị
bội Dịng
Mồi
H1959/1