- Đã tìm ram ật độ tế bào thích hợp để dung hợp 2 dịng nhị bội là 2.75 Đã tìm ra mơi trường nuơi cấy thích hợ p cho các protoplast sau dung
“Đánh giá sự sinh trưởng, phát triển và khả năng tạo củ của các dịng lai soma tứ bội tạo thành từ dung hợp tế bào trần trong điều kiện in vitro”
soma tứ bội tạo thành từ dung hợp tế bào trần trong điều kiện in vitro”
Thuộc đề tài
TẠO GIỐNG KHOAI TÂY KHÁNG BỆNH VIRUS
BẰNG DUNG HỢP TẾ BÀO TRẦN
PHẦN I. MỞĐẦU
1.1. Đặt vấn đề
Theo nhiều kết quả nghiên cứu, trở ngại lớn nhất về mặt kỹ thuật trong sản xuất khoai tây ở Việt Nam là vấn đề thối hĩa giống do nhiễm bệnh virus (Vũ Triệu Mân, 1987, 1993; Nguyễn Quang Thạch, 1993). Bên cạnh việc xây dựng hệ thống sản xuất giống sạch bệnh thì việc chọn tạo giống khoai tây cĩ khả năng kháng bệnh virus cĩ vai trị rất quan trọng. Tuy nhiên, việc chọn tạo giống khoai tây khơng đơn giản do khoai tây là cây tứ bội (2n=4x=48) được lai tạo, chọn lọc bằng phương pháp lai hữu tính kinh điển rất tốn thời gian và sức lực do quần thể con lai cĩ độ phân ly lớn sau lai tạo. Nhằm khắc phục hiện tượng này Wenzel (1979) đã đề xuất giải pháp thích hợp: dung hợp tế bào kết hợp việc tạo và chọn lọc các vật liệu diploid cùng với sự dung hợp các thể diploid cĩ định hướng để tạo ra các con lai soma mang đặc tình mong muốn với thời gian được rút ngắn đáng kể. Nhiều cơng trình nghiên cứu dung hợp tế bào trần đã được tiến hành bởi Wenzel, 1979; Thach, 1993; Thieme et al., 2004, 2006, 2008; Valkonen, 1994 và thu được nhiều kết quả cĩ ý nghĩa.
Trong chương trình chọn tạo giống khoai tây của Viện SHNN, các dịng khoai tây nhị bội (diploid, 2n = 2x = 24) được sử dụng làm vật liệu ban đầu để tạo giống kháng virus PVX và PVY bằng phương pháp dung hợp tế bào trần. Dung hợp giữa các dịng nhị bội tạo ra một tập hợp các con lai ngẫu nhiên, bao gồm cả các con lai cùng lồi (homozygous) hoặc khác lồi (hetezygous). Tiếp tục chọn lọc các con lai soma khác lồi tổ hợp được tính kháng bệnh virus (PVY, PVX) cũng như các tính trạng nơng sinh học quý của các dịng nhị bội. Cơng đoạn tiếp theo là phải đánh giá được khả năng kháng virus của các dịng lai này cùng với các tính trạng nơng sinh học so với các dạng bố mẹ nhằm mục đích chọn lọc ra những dịng cĩ triển vọng nhất để giới thiệu cho chọn tạo giống. Nhưng trước hết, cần phải đánh giá được sự sinh trưởng, phát triển cũng như khả năng tạo củ của các dịng lai soma cũng như dịng nhị bội “bố mẹ” trong điều kiện in vitro. Chính vì thế chúng tơi đã thực hiện chuyên đề:“Đánh giá sự sinh trưởng, phát triển và khả năng tạo củ in vitro của các dịng lai soma tứ bội tạo thành từ dung hợp tế bào trần”
1.2. Mục đích và yêu cầu
- Đánh giá được khả năng sinh trưởng, phát triển trong điều kiện in vitro của các con lai soma so và bố mẹ của chúng.
- Đánh giá được khả năng tạo củ in vitro của của các con lai soma so và bố mẹ của chúnG
PHẦN II. NỘI DUNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU
2.1. Vật liệu và phương pháp nghiên cứu
* Đối tượng: Vật liệu nghiên cứu gồm 5 dịng khoai tây nhị bội cĩ nguồn gốc từ Trung tâm Nghiên cứu khoai tây của Viện Nghiên cứu Tài nguyên cây trồng- Bavaria- Cộng hịa liên bang Đức cung cấp. Các dịng đã được đánh giá bởi Nguyễn Phương Thảo và cs (2009) (bảng 1).
Bảng 1. Đặc tính của các dịng khoai tây nhị bội sử dụng trong nghiên cứu
Dịng Thời gian sinh trưởng (ngày) Hàm lượng tinh bột (%) Hàm lượng đường khử (%) Tính kháng virus PVY Tính kháng virus PVX A15 90±2 15,65 0,43 + + A16 87±2 13,48 0,28 + - A41 82±2 15,05 0,29 + + B186 98±2 14,42 0,27 + + B208 97±2 14,61 0,25 + +
Ghi chú : + kháng virus - Khơng kháng virus
+ Các dịng con lai soma khoai tây: H76 (của tổ hợp A15+A41 ) H79 (của tổ hợp A15+A41) H8-12 (của tổ hợp A16+B186) H21-1 (của tổ hợp B186+B208)
* Địa điểm nghiên cứu: các nội dung được thực hiện tại Viện Sinh học Nơng nghiệp – Trường Đại học Nơng nghiệp Hà Nội.
2.2. Phương pháp nghiên cứu a, Phương pháp bố trí thí nghiệm: a, Phương pháp bố trí thí nghiệm:
2.2.1. Đánh giá khả năng sinh trưởng, phát triển các dịng lai và dịng bố mẹ trong điều kiện in vitro
Mỗi dịng thí nghiệm bố trí 15 bình/dịng, mỗi bình bố trí 5mẫu/bình theo dõi. Thí nghiệm được bố trí ba lần lặp lại, trong điều kiện in vitro,các yếu tố mơi trường MS, chếđộ chiếu sáng, chế độ nhiệt là hồn tồn giống nhau. Sau 7 ngày tiến hành đo đếm lấy số liệu một lần.
2.2.2. Đánh giá khả năng hình thành củ in vitro của con lai soma và các dịng bố mẹ
Mỗi dịng thí nghiệm bố trí 30 bình/dịng, mỗi bình bố trí 5mẫu/bình theo dõi. Sau 4-5 tuần sinh trưởng phát triển trong điều kiện in vitro (các yếu tố mơi trường MS, chế độ chiếu sáng, chếđộ nhiệt là hồn tồn giống nhau) tiến hành bổ sung mơi trường tạo củ với nồng độ đường sử dụng là 120g/l. Các bình thí nghiệm được để tối hồn tồn, sau 50-60 ngày tiến hành thu củ.
Thí nghiệm được bố trí ba lần lặp lại. Các chỉ tiêu theo dõi:
- Chiều cao cây (cm): Đo trực tiếp từ gốc đến đỉnh sinh trưởng. - Số lá trên cây (lá): Tổng số lá cĩ trên cây tại thời điểm theo dõi.
- Tổng số củ tạo thành/dịng
- Phân loại củ theo đường kính củ (Φ): 1,1cm<Φ<=1,5cm; 0,7cm<Φ<=1,1cm; 0,3cm<Φ<=0,7cm