C B186 (E1) D H1929/34 (E4)
E A16 (3) F H1959/195 (2)
3.4 Nghiên cứu xác định mơi trường thích hợp để nuơi cấy các tế bào trần tạo microcallus
microcallus
Tế bào trần sau tách cần được nuơi cấy trong mơi trường thích hợp để tế bào trần hình thành thành tế bào và phân chia tạo microcallus. Theo nguyên tắc chung, mơi trường nuơi cấy tế bào trần cần chọn lựa sao cho vừa đảm bảo được sư cân bằng áp suất thẩm thấu giữa mơi trường và nội bào, nồng độ Ca2+ trong mơi trường nuơi cấy tế bào trần thường cao hơn 2-4 lần so với mơi trương bình thường cho tới khi tái sinh được vách tế bào được và hình thành microcallus.
Kết quả về thời gian xuất hiện phân chia tế bào trên các mơi trường nuơi cấy tế bào trần sau tách của các dịng khoai tây trên các mơi trường VKM II (Thieme et al., 1997) , Medium A* (Ehsanpour et al., 2001), KM8P* (Paula Conde et al., 2006) được trình bày ở Bảng 5. Hình ảnh phân chia tế bào được thể hiện trong hình 2.
Bảng 5. Thời gian xuất hiện phân chia tế bào trần trên các mơi trường nuơi cấy khác nhau (ngày sau nuơi cấy).
Mơi trường Dịng VKMII A* KM8P* H1959/195 4 5 6 A15 3 5 7 A16 3 4 5 A41 2 4 7 A56 3 5 6 B186 2 4 5 B208 2 4 6 H1929/34 2 4 5
Hình 2 Hình ảnh phân chia tế bào sau 5 ngày nuơi cấy trên các mơi trường khác nhau
A. Tế bào trần của dịng cây H1929/34 trên mơi trường VKMII; B. Tế bào trần của dịng cây H1929/34 trên mơi trườngA*; 3.Tế bào trần của dịng cây H1929/34 trên mơi trường KM8P*; 4. Tế bào trần của dịng cây B208 trên mơi trường VKMII; 5. Tế bào trần của dịng cây B208 trên mơi trường A*; 6. Tế bào trần của dịng cây B 208 trên mơi trường KM8P*
Qua bảng 5 và các hình ảnh phân chia của tế bào sau 5 ngày nuơi cấy (hình 2) cho thấy: ảnh hưởng của các loại mơi trường khác nhau đến sự phân chia của tế bào trần là rất rõ rệt.
Trên mơi trường A* và KM8P*, thời gian bắt đầu phân chia của tế bào trần của các dịng khoai tây nghiên cứu là 4-5 ngày và 5-7 ngày tương ứng. Tốc độ phân chia tế bào thấp và khơng đồng đều. Hầu như các tế bào trần khơng hình thành được microcallus và chết sau 10-14 ngày nuơi cấy.
Các tế bào trần nuơi cấy trên mơi trường VKMII bắt đầu phân chia chỉ sau 2-3 ngày nuơi cấy tùy thuộc vào dịng khoai tây nuơi cấy. Sau 3 ngày nuơi cấy, tồn bộ các dịng đều phân chia, tạo microcallus sau 2 tuần nuơi cấy. Các dịng khoai tây khác nhau cũng cĩ sự phân chia và sự hình thành microcallus khác nhau trên mơi trường VKMII. Trong đĩ, các dịng A41, B186, B208, H1929/34 cĩ sự phân chia sớm và hình thành microcallus sớm hơn cả chỉ sau 2 ngày nuơi cấy.
Như vậy, mơi trường VKMII là mơi trường thích hợp để nuơi cấy tạo microcallus của tế bào trần.
A B C
F
D