C B186 (E1) D H1929/34 (E4)
“Nghiên cứu đánh giá quy trình dung hợp bằng xung điện các dịng khoai tây nhị bội phục vụ chương trình tạo giống khoai tây sạch bệnh virus”
3.1 Nghiên cứu các thơng số thích hợpcho dung hợp xung điện tế bào trần của các dịng khoai tây nhị bội.
dịng khoai tây nhị bội.
Tiến hành dung hợp tế bào trần ở mật độ 2x105 tế bào/ml trong dung dịch dung hợp với các thơng số dung hợp khác nhau đã được các tác giả cơng bố. Chất lượng tế bào thu được sau xung được thể hiện qua Bảng 4:
Bảng 2 Ảnh hưởng của tần số dung hợp và số lần xung đến chất lượng tế bào sau dung hợp của tổ hợp A41+A15
STT CT Thời gian tế
bào phân chia (ngày)
Thời gian xuất hiện microcallus (ngày) Số lượng macrocallus/đĩa 1 CT1 3 20,8 49,5 2 CT2 4 27,5 27,6 3 CT3 2 18,4 65,4 4 CT4 4 24,3 38,2 Chú thích:
CT1- AC=700 kHz+ 3 lần xung (Rokka et al, 1994)
CT2- 800 kHz+ 2 lần xung CT3- 900 kHz+2 lần xung CT4- 1000KHz+1 lần xung
Chất lượng tế bào của tổ hợpA41+A15 sau dung hợp được thể hiện qua hình ảnh 4
A B C F H G E D
Hình 1 Chất lượng tế bào sau dung hợp và sự hình thành macrocallus ở các tần và số lần xung khác nhau.
Chú thích: A-chất lượng tế bào sau dung hợp ở tần số 700 kHz+ 3 lần sung, B- chất lượng tế bào sau dung hợp ở tần số 800 kHz+ 2 lần sung, C- chất lượng tế bào sau dung hợp ở tần số 900 kHz+ 2 lần sung, D- chất lượng tế bào sau dung hợp ở tần số 1000 kHz+ 1 lần sung, E- Macrocallus hình thành từ tế bào sau dung hợp ở tần số 700 kHz+ 3 lần sung, F - Macrocallus hình thành từ tế bào sau dung hợp ở tần số 700 kHz+ 3 lần sung, E- Macrocallus hình thành từ tế bào sau dung hợp ở tần số 800 kHz+ 2 lần sung, G- Macrocallus hình thành từ tế bào sau dung hợp ở tần số 900 kHz+ 2 lần sung, H- Macrocallus hình thành từ tế bào sau dung hợp ở tần số 1000 kHz+ 1 lần sung.
Từ kết quả Bảng 2 và hình 1 cho thấy: tần số và số lần xung hợp ảnh hưởng rõ rệt đến chất lượng tế bào sau dung hợp.
Ở tần số 700 kHz và 3 lần xung, tế bào thu được sau dung hợp hầu như bị vỡ nát, những tế bào sống sĩt sau 5 ngày nuơi cấy mới cĩ hiện tượng phân chia và sau 26,8 ngày microcallus mới hình thành, tỷ lệ hình thành macrocallus từ microcallus thấp trung bình chỉ cĩ 9,5 macrocallus/đĩa.
Tế bào được dung hợp ở các thơng số của CT2 (tần số 800kHz và 2 lần sung), tế bào cĩ tỷ lệ nguyên vẹn cao, thời gian xuất hiện hiện phân chia sớm (sau 2 ngày nuơi cấy), các microcallus hình thành sau 18,4 ngày nuơi cấy trên mơi trường lỏng, số macrocallus hình thành/đĩa nhiều nhất (trung bình 85,4 macrocallus/đĩa).
Khi tăng tần số xung lên 900 kHz và giữ nguyên số lần xung (CT3) thì tỷ lệ tế bào vỡ tăng, tế bào phân chia muộn hơn so với CT2 (4 ngày), số macrocallus hình thành chỉ đạt 27,6 macrocallus/đĩa. Tương tự, khi dung hợp ở tần số 1000 kHz và 1 lần xung sau 3 ngày tế bào mới phân chia và số macrocallus/đĩa đạt 38,2 macrocallus.
Như vậy dung hợp ở thơng số 800 kHz và 2 lần xung là thích hợp nhất cho dung hợp xung điện trên đối tượng là các dịng khoai tây nhị bội.