Phương phỏp nghiờn cứu phõn lập vi khuẩn gõy sõu răng Streptococcus mutans từ cỏc bệnh phẩm mắc bệnh sõu răng

NGUYấN LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIấN CỨU

2.2.2. Phương phỏp nghiờn cứu phõn lập vi khuẩn gõy sõu răng Streptococcus mutans từ cỏc bệnh phẩm mắc bệnh sõu răng

2.2.2.1. Phõn lập trờn mụi trường Mitis salivarius

Thành phần của mụi trường Mitis Salivarius (DifcoTM –Mỹ) Casein thủy phõn...6,0 g Proteose Peptone số 3.. ...9,0 g Proteose Peptone ...5,0 g Đường dextrose...1,0 g Đường sucrose...50,0 g K2HPO4...4,0 g Trypan xanh ...75,0 mg Tinh thể Violet...0,8 mg Thạch...15,0 g Nước cất... 1 lớt

90 g bột mụi trường mitis salivarius được hũa tan hoàn toàn trong 1 lớt nước cất và được khử trựng trong nồi hấp ở 121 °C trong 15 phỳt. Mụi trường sau khi khử trựng được giữ ở nhiệt độ 50 đến 55 °C, sau đú được bổ sung 1 ml dung dịch tellurite 1% đó vụ khuẩn qua màng lọc 0,45 m. Mụi trường Mitis salivarius thành phẩm đầy đủ cú màu xanh lam sẫm, đồng nhất, giỏ trị pH ở 25 oC là 7,0 ± 0,2 và bảo quản ở 4 °C trước khi sử dụng.

Cỏc mẫu bệnh phẩm của người sõu răng người Việt Nam được lấy bằng tăm bụng khử trựng sau đú đuợc pha loóng ở cỏc nồng độ nhỏ dần 10 lần trong dung dịch muối khoỏng chứa KCl 50 mM và MgCl2 1mM và được cấy gạt trờn cỏc đĩa thạch mụi trường Mitis salivarius đó chuẩn bị ở trờn. Sau thời gian ủ ở 37°C trong thời gian từ 24 đến 48 giờ, quan sỏt cỏc khuẩn lạc mọc và phỏt triển.

2.2.2.2. Phõn lập vi khuẩn gõy sõu răng trờn mụi trường TSA pH 5,0

Cỏc khuẩn lạc vi khuẩn phỏt triển trờn mụi trường Mitis salivarius nếu cú hỡnh thỏi tương tự của S. mutans sẽ được lựa chọn, tỏch và nuụi qua đờm trong mụi trường TYG ở nhiệt độ 37 oC. Tế bào vi khuẩn sau thời gian nuụi cấy trờn mụi trường TYG được chuyển sang nuụi trờn mụi trường thạch TSA (Difco) 4% được

điều chỉnh bằng HCl để cú pH 5. Sau thời gian 24 đến 48 giờ quan sỏt, so sỏnh hỡnh thỏi cỏc khuẩn lạc phỏt triển với chủng chuẩn S. mutans GS 5.