- Thời gian nuôi sợi sau khi cấy chuyển giống dịch thể sang cơ chất
Chƣơng 4 KẾT LUẬN
Sau quá trình nghiên cứu về nấm Đầu khỉ H. erinaceus từ khâu nuôi trồng khảo nghiệm, tuyển chọn giống; Phân lập lại giống gốc; Nhân giống, sử dụng giống nấm dạng dịch thể để nuôi trồng nấm thương phẩm; Tách chiếtpolysaccharide từ quả thể nấm và thử hoạt tính sinh học của polysaccharide thu được, NCS xin đưa ra một số kết luận sau:
1. Đã nuôi trồng khảo nghiệm 4 chủng nấm Đầu khỉ H. erinaceus và tuyển chọn được chủng ký hiệu He1 có chất lượng tốt, thành phần dinh dưỡng trong quả thể nấm thành phẩm cân đối, năng suất cao, có đặc tính sinh học phù hợp với điều kiện nuôi trồng tại Việt Nam.
2. Đã đề xuất được qui trình phân lập, thuần khiết lại giống nấm Đầu khỉ He, chủ động trong việc nhân giống, duy trì, bảo tồn nguồn giống ổn định cung cấp cho sản xuất; Các điều kiện thích hợp để phân lập lại giống gốc nấm Đầu khỉ như sau:
- Quả thể chọn để phân lập lại giống gốc đang ở giai đoạn 7-9 ngày tuổi, khi quả thể nấm trưởng thành, chưa phát sinh bào tử; Quả thể có hình thái cân đối, không bị dị tật, không nhiễm bệnh.
- Phương pháp phân lập: dùng phương pháp nuôi cấy mô tế bào (mô nấm) để phân lập lại giống gốc với lượng lớn phục vụ sản xuất; Dùng phương pháp nuôi cấy bào tử để phân lập giống gốc phục vụ quá trình lưu giữ, bảo quản nguồn giống trong thời gian dài.
- Môi trường thích hợp để phân lập giống nấm Đầu khỉ: khoai tây: 200g/l; pepton: 1,5g/l; CNM: 1,5 g/l; MgSO4 .7H2O: 1 g/l; KH2PO4: 2,5 g/l; thiamin: 30 µg/l; nấm sò tươi:100g/l; cám gạo: 10 g/l; bột ngô: 10g/l; glucose:20g/l; agar: 20g/l;. pH 6,5.
- Nhiệt độ nuôi sợi giống gốc thích hợp: 24±2oC.
- Hệ sợi giống gốc nấm Đầu khỉ trong nuôi cấy thuần khiết đạt cực đại và ổn định từ ngày 12 đến ngày 14 sau khi cấy giống.
3. Đã xác định được các điều kiện thích hợp để nhân giống nấm Đầu khỉ dạng dịch thể các cấp: giống trung gian cấp 1 dung tích 200 ml, giống trung gian cấp 2 dung tích 2000 – 5000 lít, giống sử dụng trong nuôi trồng dung tích 120 lít; Từ đó đề xuất được qui trình công nghệ nhân giống dạng dịch thể trung gian cấp 1 dung tích 200 ml; Qui trình công nghệ nhân giống dạng dịch thể trung gian cấp 2 dung tích 5000 ml; Qui trình công nghệ nhân giống dạng dịch thể dung tích 120 lít sử dụng trong nuôi trồng nấm Đầu khỉ trên nguồn cơ chất tổng hợp. Với các điều kiện nhân giống như sau:
- Nhân giống trung gian cấp 1 dung tích 200ml:
+ Thành phần môi trường dinh dưỡng: sử dụng môi trường CT8 với thành phần: Khoai tây 200g/l; nấm sò tươi: 100g/l; Glucose: 15g; Pepton: 2,5g; CNM: 2g; MgSO4.7H2O: 1g; KH2PO4: 1g; K2HPO4: 1g; (NH4)2 HPO4: 1g; Thiamin: 20 µg; Nước: 1000 ml;
+ pH môi trường dinh dưỡng 6,5; Chế độ khử trùng môi trường dinh dưỡng: 115o
C trong 30-35 phút;
+ Tỉ lệ giống cấy chuyển 4% theo thể tích;
+ Chế độ nuôi lắc 150 vòng/ phút liên tục trong suốt quá trình nuôi + Nhiệt độ nuôi giống: 24±2o
C
- Nhân giống trung gian cấp 2 dung tích 2000 – 5000 ml:
+ Thành phần môi trường dinh dưỡng nhân giống nấm Đầu khỉ dạng dịch thể trung gian cấp 2: Glucose: 15g; Pepton: 4g; MgSO4 .7H2O: 1g; KH2PO4: 1g; K2HPO4: 1g; (NH4)2HPO4: 1g; thiamin: 20 µg; nước cất: 1000 ml, pH 6,5; dầu đậu tương 0,5 ml/1 lít môi trường;
+ Chế độ khử trùng môi trường dinh dưỡng nhân giống: 115o
C/50 phút; + Tỉ lệ giống cấy chuyển: 5-7%,
+ Tuổi giống sử dụng để cấy chuyển: 3 - 6 ngày tuổi, tốt nhất ở 5 ngày tuổi; + Nhiệt độ nuôi giống 24±2o
C
+ Chế chế độ sục khí: 0,4 – 0,5 lít khí/lít môi trường/phút + Thời gian nuôi: 5 ngày
- Nhân giống nấm Đầu khỉ dạng dịch thể dung tích 120 lít phục vụ nuôi trồng: + Thành phần môi trường dinh dưỡng nhân giống nấm Đầu khỉ dạng dịch thể trung gian cấp 2: Glucose: 10g/l; Saccarose: 10g/l; Bột dinh dưỡng cô đặc:20g/l; MgSO4 .7H2O: 1g/l; KH2PO4: 1g/l; K2HPO4: 1g/l; NaNO3: 1g/l; NH4NO3: 1g/l; B1: 3 viên/l; pH 6,5; dầu đậu tương 0,5 ml/1 lít môi trường;
+ Chế độ khử trùng môi trường dinh dưỡng nhân giống: 121oC/80 phút; + Tỉ lệ giống cấy chuyển: 15%,
+ Tuổi giống sử dụng để cấy chuyển: 4 - 6 ngày tuổi, tốt nhất ở 5 ngày tuổi; + Nhiệt độ nuôi giống 24±2o
C
+ Chế chế độ sục khí: 0,4 – 0,5 lít khí/lít môi trường/phút + Thời gian nuôi: 5 ngày
4. Đã xác định được các điều kiện thích hợp để nuôi trồng nấm Đầu khỉ sử dụng giống nấm dạng dịch thể, từ đó đề xuất được qui trình công nghệ nuôi trồng nấm Đầu khỉ trên nguồn cơ chất tổng hợp sử dụng giống dạng dịch thể. Các yếu tố thích hợp cho nuôi trồng nấm Đầu khỉ sử dụng giống nấm dạng dịch thể bao gồm:
+ Công thức môi trường tổng hợp sử dụng trong nuôi trồng: 45% mùn cưa + 40% lõi ngô + 6% cám gạo + 8% bột ngô + 1% CaCO3;
+ Khử trùng nguyên liệu: 100oC/7 giờ hoặc 1,2 – 1,4 atm trong 3 - 3,5 giờ; (adsbygoogle = window.adsbygoogle || []).push({});
+ Tỷ lệ giống dạng dịch thể cấy vào bịch nguyên liệu: 25 ml dịch/ bịch nguyên liệu 800 g; + Nhiệt độ ươm sợi: 23 - 25 o
C; + Nhiệt độ cho ra quả thể 20-22o
C.
So sánh hiệu quả của việc sử dụng giống nấm dạng dịch thể với giống nấm dạng rắn cho thấy so với giống trên cơ chất hạt, giống dịch thể có nhiều ưu điểm hơn hẳn như: rút ngắn tổng thời gian nhân giống các cấp và thời gian nuôi trồng nấm xuống còn một nửa, qua đó tăng hiệu suất sử dụng nhà xưởng, tăng số vụ nuôi trồng nấm trong một năm; Giảm tỷ lệ nhiễm bệnh, qua đó làm tăng năng suất thu hoạch; Giảm chi phí sản xuất do thay thế cơ chất nhân giống trên hạt thóc bằng nhân giống dạng dịch thể, giảm chi phí nhân công, điện năng, khấu hao nhà xưởng.
5. Đã đề xuất được qui trình chiết tách polysaccharide trong nước nóng và dung môi NaOH với nồng độ thích hợp là 4%, hiệu suất chiết là 20-25%.
Các phân đoạn polisaccaride tách chiết từ nấm Đầu khỉ được thử hoạt tính kháng vi sinh vật kiểm định, hoạt tính kháng u thực nghiệm nuôi cấy invitro cho kết quả âm tính; nhưng khi kiểm tra khả năng ức chế hình thành khối u trên thạch mềm cho kết quả dương tính rõ rệt đối với dòng tế ung thư gan Hep G2.
Các phân đoạn polysaccharide tách chiết từ nấm Đầu khỉ đã được thử nghiệm trên thỏ, thời gian thử nghiệm 6 tuần cho thấy chế phẩm không làm ảnh hưởng đến tốc độ tăng trọng lượng cơ thể thỏ; Không làm ảnh hưởng tới các sóng điện tim cũng như các chỉ số huyết học (hồng cầu, bạch cầu, tiểu cầu); Không làm thay đổi hoạt độ enzyme SGOT, SGPT, hàm lượng creatin máu. Như vậy, polysaccharide tách chiết từ nấm Đầu khỉ He1 an toàn ở nồng độ thử nghiệm đối với động vật nghiên cứu.
Kết quả kiểm tra khả năng bảo vệ phóng xạ trên động vật thử nghiệm cho thấy polysaccharide tách chiết từ nấm Đầu khỉ He1 có khả năng làm tăng tỷ lệ sống của chuột nhắt trắng 30% sau chiếu xạ, có tác dụng tốt đối với hệ tạo máu, phục hồi nhanh số lượng tế bào HC, BC, TC, máu ngoại vi; Polysaccharide tách chiết từ nấm Đầu khỉ He1 còn có khả năng làm giảm mức độ tổn thương ở các cơ quan có chức năng miễn dịch như lách, hạch, tuyến ức.