- Thời gian nuôi sợi sau khi cấy chuyển giống dịch thể sang cơ chất
3.4.2. Xác định hàm lượng polysaccharide trong quả thể nấm Đầu khỉ He1 trong từng thời điểm nuô
thời điểm nuôi
Thu nhận polysaccharide trong mẫu quả thể nấm Đầu khỉ: 100g quả thể nấm khô được nghiền nhỏ thành bột và được chiết trong thể tích 1 lít nước cất tại 100 C trong 8giờ; Dịch chiết nấm được lọc qua vải và bã nấm tiếp tục được chiết như trên thêm 2 lần nữa. Dịch lọc của 3 lần chiết được gộp lại và cô tới thể tích 100 mL, sử dụng máy cô chân không tại 70 C, thu được dịch chiết nước nóng. Polysaccharide được kết tủa bằng việc bổ sung 3 lần thể tích cồn tuyệt đối vào dịch chiết, ủ qua đêm tại 4 C. Polysaccharide được thu bằng ly tâm dịch tủa tại 10.000 vòng/phút trong 10 phút. Kết tủa được rửa bằng methanol và hòa tan lại trong nước cất. Phần bã nấm được bổ sung 1 L NaOH 5% và ủ tại
56 C qua đêm. Phần dịch tan trong kiềm được thu lại bằng lọc qua vải; Bã nấm tiếp tục được chiết kiềm 2 lần nữa. Dịch lọc của 3 lần chiết kiềm được gộp lại, trung hòa bằng dung dịch axit axetic 1M tới pH 6,5-7,0 và polysaccharide được kết tủa bằng bổ sung 3 lần thể tích cồn tuyệt đối lạnh, ủ tại 4 C qua đêm. Kết tủa polysaccharide được thu bằng ly tâm dịch đã tủa tại 10.000 vòng/phút trong 10 phút; Kết tủa được rửa lại bằng methanol và được hòa lại trong nước cất.
X nấm: 100
l dung 500 2SO4
150 l dịch phản ứng được cho vào giếng của phiến 96 giếng, so Mẫu đối chứng được chuẩn bị tương tự dùng 100 l nước cất thay thế với mẫu thử.
Tiến hành lặp lại 3 lần, lấy giá trị trung bình của 3 lần đo. Kết quả được trình bày trong bảng 3.40.
Bảng 3.40: Hàm lượng polysaccharide của các mẫu nấm thu hái tại các thời điểm khác nhau (g/100 g nấm khô)
Ghi chú:
Mẫu 1: Quả thể 1 ngày tuổi (tính từ thời điểm xuất hiện mầm quả thể) Mẫu 2: Quả thể 3 ngày tuổi (tính từ thời điểm xuất hiện mầm quả thể) Mẫu 3: Quả thể 5 ngày tuổi (tính từ thời điểm xuất hiện mầm quả thể) Mẫu 4: Quả thể 7 ngày tuổi (tính từ thời điểm xuất hiện mầm quả thể) Mẫu 5: Quả thể 9 ngày tuổi (tính từ thời điểm xuất hiện mầm quả thể) Mẫu 6: Quả thể 11 ngày tuổi (tính từ thời điểm xuất hiện mầm quả thể) Mẫu 7: Quả thể 13 ngày tuổi (tính từ thời điểm xuất hiện mầm quả thể)
Mẫu Phân đoạn
Mẫu 1 Mẫu 2 Mẫu 3 Mẫu 4 Mẫu 5 Mẫu 6 Mẫu 7
Polysaccharide chiết nước nóng 4,73 4,44 4,38 4,39 4,69 3,57 3,21 Polysaccharide chiết NaOH 2,13 3,22 3,70 4,64 4,59 4,12 4,00 Polysaccharide tổng 6,85 7,66 8,07 9,03 9,28 7,69 7,21
Hình 3.48: Sự tích lũy polysaccharide theo thời gian của quả thể nấm Đầu khỉ He1
Kết quả tách chiết và xác định hàm lượng polysaccharide trong 7 mẫu nấm Đầu khỉ ở các độ tuổi từ 1 ngày tuổi đến 13 ngày tuổi cho thấy tổng hàm lượng polysaccharide trong 5 mẫu nấm từ 1 đến 9 ngày tuổi tăng dần, các mẫu từ 11 đến 13 tuổi giảm so với mẫu 9 ngày tuổi. Như vậy, hàm lượng polysaccacharide tổng số trong quả thể nấm tăng theo thời gian, từ khi quả thể mới hình thành cho tới khi quả thể trưởng thành; Khi quả thể bước sang giai đoạn bắt đầu phát tán bào tử thì hàm lượng polysaccharide giảm dần, đồng thời trọng lượng quả thể cũng giảm mạnh; do đó khi nuôi trồng nấm Đầu khỉ cần thu hái đúng độ tuổi, khi quả thể nấm đạt 9 ngày tuổi (tính từ thời điểm xuất hiện mầm quả thể) để sản phẩm nấm có chất lượng tốt, đảm bảo được các thành phần dinh dưỡng và dược liệu trong nấm cao.