CHƯƠNG II : NỘI DUNG NGHIÊN CỨU
2.1 Nội dung 1 Nghiên cứu các điều kiện để nuôi cấy nấm men Rhodosporidium sp phát
2.1.2 Khảo sát đường cong tăng trưởng và hàm lượng astaxanthin của chủng nấm men
men
2.1.2.1 Khảo sát đường cong tăng trưởng
Ø Mục đích:
Xác định đường cong tăng trưởng phục vụ cho việc xác định thời điểm thu sinh
khối và khảo sát khả năng tích lũy astaxanthin trong tế bào vi sinh vật ở những giai đoạn
sinh trưởng khác nhau.
Ø Nguyên tắc:
Sự tăng trưởng của vi sinh vật là sự gia tăng số lượng tế bào vi sinh vật trong quần thể và tốc độ tăng trưởng là sự tăng trưởng của vi sinh vật trong một đơn vị thời gian.
Mỗi quần thể sinh vật thường có đặc trưng sinh trưởng riêng khi ni cấy trong một hệ thống kín ở mơi trường và điều kiện nhất định. Thông thường trải qua các giai đoạn: pha tìm tàn (lag phase), pha hàm mũ (log phase), pha ổn định (stationry phase) và pha suy tàn (death phase).
Bằng cách đo độ đục của môi trường nuôi cấy vi sinh vật (OD) trong các khoảng thời gian từ khi bắt đầu nuôi cấy và ngoại suy từ đồ thị chuẩn của đường tương quan
tuyến tính giữa giá trị OD610nm và mật độ tế bào log (N/ml) ta tính được giá trị log (N/ml)
tương ứng với các khoảng thời gian xác định từ đó ta dựng được đồ thị đường cong tăng trưởng của vi sinh vật (biến thiên giá trị log (N/ml) theo thời gian (t))[10,47].
Ø Phương pháp :
Nuôi cấy vi sinh trong môi trường Hansen lỏng ở nhiệt độ phòng.
Đo OD610nm hai giờ một lần đến khi thấy OD610nm giảm xuống thì dừng (tế bào đã đi
17
Từ chỉ số OD610nm dựa vào đường tương quan tuyến tính suy ra mật độ tế bào log (N/ml).
Vẽ đồ thị thể hiện đường cong tăng trưởng log (N/ml) bằng phần mềm Microsoft
Excel 2007.
2.1.2.2 Khảo sát sự thay đổi hàm lượng astaxanthin trong các giai đoạn của quá trình tăng trưởng
Thí nghiệm này được tiến hành nhằm xác định thời điểm astaxanthin đạt hàm lượng cao nhất tính trên thể tích dịch ni cấy, từ đó xác định thời điểm thích hợp cho việc thu sinh khối.
Ø Cách tiến hành: