CHƯƠNG II : NỘI DUNG NGHIÊN CỨU
2.1 Nội dung 1 Nghiên cứu các điều kiện để nuôi cấy nấm men Rhodosporidium sp phát
2.1.3 Khảo sát ảnh hưởng của một số yếu tố ảnh hưởng đến sự tích lũy sắc tố ở nấm men
nguồn nitơ tối ưu cho sự phát triển và tổng hợp astaxanthin).
Nuôi cấy lắc trong điều kiện nhiệt độ, ánh sáng tự nhiên (tốc độ lắc 200 vòng/ phút). Ly tâm thu sinh khối vào các giai đoạn sinh trưởng khác nhau (pha log, pha ổn định, pha suy tàn).
Tách chiết sắc tố từ sinh khối khô.
Xác định hàm lượng astaxanthin.
Các chỉ tiêu cần ghi nhận:
· Trọng lượng sinh khối khô (g/l).
· Hàm lượng astaxanthin (µg/g sinh khối khơ).
· Hàm lượng astaxanthin (µg/l thể tích dịch ni cấy).
2.1.3 Khảo sát ảnh hưởng của một số yếu tố ảnh hưởng đến sự tích lũy sắc tố ở nấm men nấm men
2.1.3.1 Ảnh hưởng của pH
Chuẩn bị môi trường Hansen lỏng ở các độ pH khác nhau từ 3,0 - 8,0 (cách nhau 0,5 đơn vị)
18
Phân phối 100 ml mơi trường vào các bình (thể tích 250 ml), sau đó đem hấp khử
trùng ở 1210C, 1 atm trong 15 phút.
Cấy 0,1 ml dịch nuôi cấy nấm men (sau 2 ngày nuôi cấy lắc trong môi trường Hansen ở nhiệt độ phịng với OD610nm= 0.3) vào mỗi bình chứa 100 ml môi trường đã qua khử trùng.
Đem các bình ni cấy lắc trong điều kiện nhiệt độ, ánh sáng tự nhiên (tốc độ lắc
200 vòng/ phút).
Ly tâm thu sinh khối vào giai đoạn sinh trưởng có hàm lượng astaxanthin cao nhất (dựa vào mục 2.1.2.2).
Tách chiết sắc tố từ sinh khối khô.
Xác định hàm lượng astaxanthin.
Các chỉ tiêu cần ghi nhận:
o Trọng lượng sinh khối khô (g/l).
o Hàm lượng astaxanthin (µg/g sinh khối khơ).
o Hàm lượng astaxanthin (µg/l thể tích dịch ni cấy).
2.1.3.2 Ảnh hưởng của hàm lượng glucose
Thành phần mơi trường gồm có Pepton (10 g/l), MgSO4 (3-5 g/l), KH2PO4 (3 g/l),
môi trường được bổ sung hàm lượng glucose thay đổi từ 30 – 70 g/l (cách nhau 5 đơn vị), được điều chỉnh về pH tối ưu. Được xác định ở mục 2.1.3.1.
Phân phối 100 ml môi trường vào các bình (thể tích 250 ml), sau đó đem hấp khử
trùng ở 1210
C, 1 atm trong 15 phút.
Cấy 0,1 ml dịch nuôi cấy nấm men (sau 2 ngày nuôi cấy lắc trong môi trường Hansen ở nhiệt độ phòng với OD610nm= 0.3) vào mỗi chai chứa 100 ml môi trường đã qua khử trùng.
Đem các bình ni cấy lắc trong điều kiện nhiệt độ, ánh sáng tự nhiên (tốc độ lắc
19
Ly tâm thu sinh khối vào giai đoạn sinh trưởng có hàm lượng astaxanthin cao nhất (dựa vào mục 2.1.2.2).
Tách chiết sắc tố từ sinh khối khô.
Xác định hàm lượng astaxanthin.
Các chỉ tiêu cần ghi nhận:
Trọng lượng sinh khối khơ (g/l).
Hàm lượng astaxanthin (µg/g sinh khối khơ).
Hàm lượng astaxanthin (µg/l thể tích dịch ni cấy).
2.1.2.3 Ảnh hưởng của hàm lượng đạm hữu cơ (Pepton)
Thành phần môi trường gồm có KH2PO4, MgSO4 (3-5 g/l), Glucose tối ưu, môi
trường được bổ sung hàm lượng Pepton thay đổi từ 2 - 18 g/l (cách nhau 2 đơn vị), được điều chỉnh về pH tối ưu. Được xác định ở mục 2.1.2.2.
Tiến hành các bước tương tự mục 2.1.2.1.
2.1.2.4 Ảnh hưởng của hai ion kim loại Magiê và Kali
Thành phần môi trường 1 gồm có KH2PO4 (3 g/l), Glucose tối ưu, Pepton tối ưu, MgSO4 (3 g/l).
Ø Môi trường 2 tương tự môi trường 1 nhưng loại đi thành phần KH2PO4. Ø Môi trường 3 tương tự môi trường 1 nhưng loại đi thành phần MgSO4.
Ø Môi trường 4 tương tự môi trường 1 nhưng loại đi hai thành phần KH2PO4, được điều chỉnh về pH tối ưu. Được xác định ở 2.1.3.1.
Tiến hành các bước tương tự mục 2.1.3.2.
2.1.2.5 Ảnh hưởng của hàm lượng ion Magiê
Thành phần mơi trường gồm có KH2PO4 (3 g/l), Glucose tối ưu, Pepton tối ưu môi
trường được bổ sung hàm lượng MgSO4, thay đổi từ 1 - 6 g/l (cách nhau 1 đơn vị), được
điều chỉnh về pH tối ưu. Được xác định ở 2.1.3.1.
20
2.1.2.6 Ảnh hưởng của hàm lượng ion Kali
Thành phần mơi trường gồm có MgSO4 tối ưu, Glucose tối ưu, Pepton tối ưu, môi
trường được bổ sung hàm lượng KH2PO4, thay đổi từ 1 - 6 g/l (cách nhau 1 đơn vị), được điều chỉnh về pH tối ưu. Được xác định ở 2.1.3.1.
Tiến hành các bước tương tự mục 2.1.3.2.