(Đức).
- Nguyờn lý: hoạt độ peroxidase được xỏc định, khi sử dụng 3,3’-5,5’
tetramethyl benzidine (TMB) làm cơ chất theo phương phỏp của Josephy và cộng sự (1982). Trong mụi trường đệm phản ứng thớch hợp cú hydrogen peroxide (H2O2) và cơ chất TMB, H2O2 sẽ được khử thành H2O và oxy húa cơ chất TMB tạo thành hợp chất cú màu xanh hấp thụ cực đại ở bước súng 492nm.
Phương trỡnh phản ứng:
H2O2 + 2 TMB → oxidized-TMB + H2O
Hoạt độ peroxidase được xỏc định khi so sỏnh giỏ trị mật độ quang ở bước súng 492nm trờn đồ thị đường chuẩn của HPO.
- Tiến hành: thành phần phản ứng xỏc định hoạt độ peroxidase: 40 àL
3,3’-5,5’ tetramethyl benzidine (6mg TMB trong 1mL DMSO); 250àL đệm 100mM natri acetate pH 5,5; 2mL nước cất, 10àL dung dịch 0,5% H2O2; 100àL dung dịch enzym (100àL nước cất cho đối chứng). Để yờn dung dịch trong vũng 15 phỳt ở 250C cho phản ứng xảy ra. Dừng phản ứng bằng 100àL dung dịch 2N H2SO4. Đo mật độ quang ở bước súng 492nm.
- Kết quả: được biểu thị bằng đơn vị àg/mg protein.
* Xỏc định hoạt độ superoxide dismutase (SOD) hồng cầu.
- Xột nghiệm được thực hiện trờn mỏy: phõn tớch húa sinh tự động Kessys
- Nguyờn lý:
Hoạt độ superoxide dismutase (SOD) được xỏc định theo phương phỏp của Mc Cord và Fridovich (sử dụng enzym xanthine oxidase (XO) để oxy húa xanthine và sinh ra superoxide (O2-)).
Superoxide sẽ khử cyt(Fe3+) thành cyt(Fe2+), cú phổ hấp thụ cực đại ở bước súng 550nm. Do vậy khi cú mặt superoxide, cyt(Fe2+) sẽ được sinh ra từ cyt(Fe3+) và làm tăng giỏ trị hấp thụ tại bước súng 550nm. Nhưng nếu trong hỗn hợp phản ứng cú thờm SOD thỡ enzym này sẽ phõn hủy superoxide thành H2O2, làm giảm tốc độ hỡnh thành cyt(Fe2+), đồng nghĩa với việc làm giảm tốc độ gia tăng giỏ trị hấp thụ 550nm, thậm chớ dừng hẳn.