Cách gây miễn dịch
Hiệu quả sinh kháng thể IgY đặc hiệu bị ảnh hƣởng bởi các yếu tố liên quan trong cách gây miễn dịch nhƣ kháng nguyên, tá dƣợc, tiêm chủng.
Kháng nguyên là protein có tính sinh miễn dịch cao và cần có độ tinh sạch cao [96]. Nghiên cứu này sử dụng kháng nguyên là BSA và các độc tố ruột tụ cầu có bản chất là protein và là sản phẩm thƣơng mại nên có độ tinh sạch cao.
Hơn nữa, theo khuyến cáo của nhóm chuyên gia của trung tâm phê chuẩn phƣơng pháp mới của Châu Âu (European Centre for the Validation of Alternative Methods: ECVAM): thể tích tiêm trong mỗi lần tiêm gà không nên quá 1 ml, trong đó nồng độ kháng nguyên giao động khác nhau (từ 10 ng đến 1mg), số lần tiêm 2 – 3 lần tùy vào bản chất của kháng nguyên [93]. Nghiên cứu này sử dụng thể tích tiêm 0,5 ml cho một vị trí tiêm và tiêm ở hai vị trí trong mỗi lần tiêm chủng, phù hợp với thể tích đƣợc khuyến cáo. Nồng độ kháng nguyên và số lần tiêm để gây miễn dịch là khác nhau: với BSA, nồng độ là 1mg/ml; với 5 loại độc tố ruột tụ cầu là 100ng/ml. Trên thế giới đã có nhiều công trình nghiên cứu sử dụng BSA tiêm chủng cho gà [83, 93], nồng độ protein BSA đƣợc tiêm là 1mg/ml là nồng độ thích hợp và số lần tiêm là 3 lần phù hợp cho sản xuất kháng thể IgY. Ngƣợc lại, với các độc tố ruột tụ cầu, do có hoạt tính siêu kháng nguyên nên để an toàn cho gà, hạn chế ảnh hƣởng xấu tới khả năng đẻ trứng, chúng tôi chọn nồng độ thấp trong khoảng nồng độ đƣợc khuyến cáo của liều kháng nguyên để gây miễn dịch (20ng/ một loại độc tố SE) và số lần tiêm là 2 lần. Bên cạnh đó, tá dƣợc FCA đƣợc lựa chọn sử dụng cho mũi tiêm đầu, còn các mũi tiêm sau
88
sử dụng tá dƣợc FIA, đây cũng là cách làm phổ biến đƣợc thực hiện trong nhiều nghiên cứu cho hiệu quả kích thích miễn dịch sinh kháng thể mạnh ở gà mái. Cách thức này phù hợp với các nghiên cứu khác ở trong nƣớc và trên thế giới [9, 84, 101].
Thu hoạch trứng có nồng độ kháng thể cao
Theo một số nghiên cứu đã tiến hành trên thế giới, thời điểm thu hoạch trứng siêu miễn dịch có thể bắt đầu sớm nhất là 1 tuần sau lần tiêm đầu tiên, nhƣng hiệu giá IgY cao nhất ở tuần thứ 3 sau khi tiêm lần đầu và ở tuần thứ 2 sau khi tiêm nhắc lại [26]. Do đó, trứng nên đƣợc thu hoạch một cách phù hợp sau lần tiêm thứ 2 [92]. Sau khi gây miễn dịch, IgY đặc hiệu xuất hiện trong huyết thanh gà khoảng 4 ngày sau khi tiêm kháng nguyên và đạt hiệu giá tối đa sau 6 đến 8 ngày sau tiêm và giảm dần sau đó, đƣợc vận chuyển qua ống dẫn trứng vào lòng đỏ trứng khoảng 5- 6 ngày [92]. Vì vậy, chúng tôi đã thu trứng từ ngày thứ 12 sau lần tiêm nhắc lại đến sau 14 ngày đối với các lô gà thí nghiệm đƣợc sử dụng cho quá trình tinh sạch IgY. Đây là khoảng thời gian gà đẻ những quả trứng có nồng độ kháng thể IgY đặc hiệu cao.