Cho đến nay đã có nhiều nghiên cứu để sản xuất các SE trực tiếp từ S. aureus.
Một nghiên cứu của Edward J. Schantz và cộng sự cho thấy độc tố SEB đƣợc thu nhận trực tiếp từ môi trƣờng nuôi cấy của S. aureus và tinh sạch bằng sắc ký trên màng carboxylmethyl - cellulose [37]. Năm 1967, với phƣơng pháp sắc ký trên cột CM- cellulose và phƣơng pháp mới khi áp dụng gel lọc Sephadex G-75 và G-50, Concordia R.Bojia và Merlin S. Berdoll đã thu đƣợc độc tố SEC [27]. Năm 1979, Chang HC, Bergdoll MS đã kết hợp 2 phƣơng pháp tinh sạch bằng sắc ký trên màng carboxylmethyl- cellulose và áp dụng cột lọc Sephadex G-75 để thu đƣợc SED [24]. Các nghiên cứu sản xuất độc tố ruột tụ cầu trực tiếp từ S.aureus đã sản xuất ra ít nhất 12 loại độc tố ruột tụ cầu nhƣ sau: SEA, SEB, SEC, SED, SEE, SEG, SEH, SEI, SEJ, SEK, SEL và SEM [70].
Tùy theo mục tiêu sản xuất, dụng cụ, hóa chất có sẵn và điều kiện sản xuất, ngƣời ta đã tiến hành sản xuất các SE theo quy mô nhỏ hay quy mô lớn.
* Quy mô nhỏ: Sản xuất các SE quy mô nhỏ có những phƣơng pháp nhƣ nuôi trên thạch rắn, nuôi trên thạch bán rắn, nuôi lắc trong bình tam giác và nuôi trong túi [70]. Các phƣơng pháp này thƣờng đƣợc sử dụng để sản xuất và tinh sạch một lƣợng nhỏ độc tố để phân lập dòng vi khuẩn tạo các SE. Phƣơng pháp nuôi trên thạch rắn là phƣơng pháp đơn giản để nuôi các chủng tụ cầu tạo SE nhằm phân loại các chủng tạo độc tố tụ cầu. Robbins năm 1974 đã nuôi S. aureus trên môi trƣờng thạch bán rắn ở đĩa Petri [94]. Bên cạnh đó, nhiều độc tố đƣợc sản xuất bằng phƣơng pháp nuôi lắc vi khuẩn trong bình tam giác và thu đƣợc sản lƣợng độc tố SEA, SED và SEE tăng gấp 10 lần so với các phƣơng pháp thông thƣờng, trong khi đó độc tố SEB và SEC tăng ít hơn (gấp 2 lần). Với phƣơng pháp nuôi trong túi, môi trƣờng đƣợc đặt trong túi thẩm tích và đặt ở đáy bình tam giác, 20ml dịch chứa tế bào đƣợc thêm vào, thời gian nuôi
50
cấy là 24 giờ, lắc ở tốc độ vừa phải để dịch nuôi cấy đƣợc trộn đều trong túi thẩm tích. Môi trƣờng canh thang BHI (Brain heart infusion) thƣờng đƣợc sử dụng để sản xuất SE, đặc biệt ở quy mô nhỏ [70].
* Quy mô lớn: Thông thƣờng, sự sản xuất SE ở quy mô lớn đƣợc thực hiện
trong bình tam giác hoặc các bình tƣơng tự với phƣơng pháp lắc, hoặc trong quá trình lên men. Các kích cỡ của bình chứa môi trƣờng lên men là khác nhau, các bình có kích thƣớc 0,5 - 2000 lít thƣờng đƣợc sử dụng cho quá trình sản xuất SE này. Metzger và cộng sự (1973) đã sản xuất đƣợc một lƣợng lớn độc tố SEB (lên đến 600 µg) trong một thể tích 50 lít môi trƣờng lên men [55]. Carpenter (1974) đã sản xuất đƣợc một lƣợng tƣơng đƣơng SEB trong 0,5 lít môi trƣờng nuôi cấy ở bình 1 lít [30]. Jarvis (1973) đã sản xuất đƣợc nhiều độc tố SEA trong 2 lít ở môi trƣờng lên men nhiều hơn so với trong bình lắc. Ngƣợc lại, với SEB và SEC thì thu đƣợc ở môi trƣờng lên men là ít hơn [17]. Nồng độ ô xy hòa tan có ảnh hƣởng đến sự sản xuất SEC: Carpenter và Silverman (1974) đã phát hiện ra rằng ở mức 10-50% lƣợng oxy hòa tan thì SEB đƣợc sản xuất nhiều hơn so với ở mức 0% hoặc 100%. Năm 1973, Metzger và các cộng sự đã tìm ra một phƣơng pháp tối ƣu về điều kiện môi trƣờng để tạo sản lƣợng SE cao, bằng cách thêm cao nấm men vào môi trƣờng nuôi cấy [55]. Các độc tố SEA và SEB đã đƣợc tạo ra với một sản lƣợng cao hơn sau khi bổ sung 1% cao men, 0,2% glucose và 4% NZA-A với các mức lần lƣợt là hơn 100µg/ml của SEA và hơn 400µg/ml SEB [70].