2.3.1. Nghiên cứu nhân giống cấp 1 nấm Ngọc Châm dạng dịch thể
Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 23
nhắc 5 bình loại 500ml/công thức, mỗi bình chứa 200ml môi trường. Tổng số 15 bình /công thức. Khử trùng môi trường ở 1210C trong 80 phút.
2.3.1.1. Thí nghiệm 1: Ảnh hưởng của thành phần môi trường dịch thểđến sự sinh trưởng và đặc điểm hệ sợi nấm Ngọc Châm cấp 1.
Công thức 1: 200g giá đỗ + 0,5g MgSO4.7H2O+ 1g KH2PO4 + 15g glucose + 100g nấm tươi
Công thức 2: 5g pepton + 0,5g MgSO4.7H2O + 1g KH2PO4 + 15g glucose + 100g nấm tươi
Công thức 3: 10g pepton + 0,5g MgSO4.7H2O + 1g KH2PO4 + 15g glucose + 100g nấm tươi
Công thức 4: 15g pepton + 0,5g MgSO4.7H2O + 1g KH2PO4 + 15g glucose + 100g nấm tươi
Công thức 5: 10g NH2SO4 + 0,5g MgSO4.7H2O + 1g KH2PO4 + 15g glucose + 100g nấm tươi
Thí nghiệm gồm 5 công thức, pH của môi trường được hiệu chỉnh để đạt pH = 6, nuôi sợi ở nhiệt độ 25±1ºC, chế độ lắc là 150 vòng/phút, thời gian nuôi là 7 ngày. Nước cất được bổ sung cho đủ 1000ml dịch vào mỗi công thức
* Theo dõi các chỉ tiêu: mật độ khuẩn cầu, đặc điểm khuẩn cầu, sinh khối sợi nấm.
2.3.1.2. Thí nghiệm 2: Nghiên cứu ảnh hưởng của pH đến sự sinh trưởng của hệ
nấm Ngọc Châm trong môi trường dịch thể
Tiến hành nuôi cấy giống nấm Ngọc Châm trong môi trường dịch tốt nhất đã xác định ở thí nghiệm 1, môi trường được hiệu chỉnh pH về các ngưỡng: 4, 5, 5.5, 6, 6.5, 7, nuôi sợi trong cùng một điều kiện: nhiệt độ 25±1ºC, chế độ lắc liên tục là 150 vòng/phút, thời gian nuôi là 7 ngày.
Thí nghiệm gồm 6 công thức:
Công thức 1: pH = 4,0 Công thức 4: pH = 6 Công thức 2: pH = 5,0 Công thức 5: pH = 6,5 Công thức 3: pH = 5,5 Công thức 6: pH = 7
Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 24
2.3.1.3. Thí nghiệm 3: Nghiên cứu ảnh hưởng của nhiệt độ đến sự sinh trưởng phát triển của hệ nấm Ngọc Châm trong môi trường dịch thể.
Nuôi nấm Ngọc Châm trong môi trường dịch thể tốt nhất đã xác định ở thí nghiệm 1, với pH tối ưu đã xác định ở thí nghiệm 2, chế độ lắc 150 v/p, các điều kiện nhiệt độđược kiểm soát và biến động ±1°C. Gồm 5 công thức:
Công thức 1: 14°C Công thức 4: 26°C Công thức 2: 18°C Công thức 5: 30°C Công thức 3: 22°C
* Theo dõi các chỉ tiêu: Đường kính khuẩn lạc cầu, số lượng khuẩn lạc cầu và sinh khối sợi (cách xác định: mục 2.4)
2.3.1.4. Thí nghiệm 4: Nghiên cứu ảnh hưởng của chế độ lắc đến sự sinh trưởng phát triển của hệ nấm Ngọc Châm trong môi trường dịch thể
Nuôi nấm Ngọc Châm trong môi trường dịch thể, pH, nhiệt độ nuôi tối ưu đã xác định ở các thí nghiệm trước với các chế độ lắc khác nhau, nuôi trong 7 ngày. Thí nghiệm tiến hành với 5 công thức, tốc độ lắc khác nhau:
Công thức 1: lắc 100 vòng/ phút Công thức 4: lắc 160 vòng/ phút Công thức 2: lắc 120 vòng/ phút Công thức 5: lắc 180 vòng/ phút Công thức 3: lắc 140 vòng/ phút
* Theo dõi các chỉ tiêu sau 7 ngày nuôi: Kích thước khuẩn lạc cầu, mật độ hệ sợi nấm, sinh khối sợi nấm.
2.3.1.5. Thí nghiệm 5: Nghiên cứu ảnh hưởng của thời gian nuôi đến sự sinh trưởng phát triển của hệ sợi nấm Ngọc Châm trong môi trường dịch thể
Nuôi sợi nấm Ngọc Châm trong môi trường dịch thể, pH, nhiệt độ, chế độ
lắc đã xác định ở các thí nghiệm trên. Theo dõi sinh trưởng của giống trong các giai
đoạn tuổi, bao gồm 5 công thức.
Công thức 1: 48 giờ Công thức 4: 144 giờ
Công thức 2: 96 giờ Công thức 5: 168 giờ
Công thức 3: 120 giờ Công thức 6: 192 giờ
* Theo dõi các chỉ tiêu: Đặc điểm khuẩn lạc cầu, mật độ khuẩn cầu và sinh khối sợi nấm.
Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 25
2.3.2. Nghiên cứu nhân giống nấm Ngọc Châm dạng dịch thể cấp trung gian
Thí nghiệm bố trí theo khối ngẫu nhiên đầy đủ, 3 lần nhắc lại mỗi lần nhắc 5 bình duran loại 5000ml/công thức, mỗi bình duran chứa 3000 ml môi trường. Tổng cộng 15 bình dural/công thức. Nuôi trong điều kiện nhiệt độ 25oC, thời gian nuôi 168 giờ.
2.3.2.1.Thí nghiệm 6: Nghiên cứu ảnh hưởng của tỷ lệ giống cấy tới sự sinh trưởng của giống nấm Ngọc Châm cấp trung gian
Tỷ lệ giống cấp 1 dùng để cấy giống trung gian so với môi trường sẽ nuôi cấy giống bao gồm các công thức:
Công thức 1: 5% giống Công thức 3:10% giống Công thức 2: 7% giống Công thức 4: 12% giống
Công thức 4: 15% giống * Theo dõi các chỉ tiêu: mật độ hệ sợi, sinh khối sợi nấm.
2.3.3. Nghiên cứu sử dụng giống dịch thểđể nuôi trồng nấm Ngọc Châm thương
phẩm.
Trong giai đoạn nuôi trồng: mỗi công thức thí nghiệm bố trí 50 bịch nguyên liệu. Tổng số 150 bịch nguyên liệu/công thức thí nghiệm; theo dõi các chỉ tiêu sinh trưởng 30 bịch/công thức thí nghiệm, lấy mẫu theo 5 điểm của đường chéo, mỗi
điểm 6 bịch. Thí nghiệm bố trí theo khối ngẫu nhiên đầy đủ.
2.3.3.1. Thí nghiệm 7: Khảo sát thành phần cơ chất nuôi trồng nấm Ngọc châm
Công thức 1 - đối chứng (ĐC): 45 % mùn cưa + 40 % bã mía + 7% bột ngô + 7% cám gạo + 1% CaCO3, sử dụng giống Ngọc Châm cấp trung gian trên cơ chất hạt
Công thức 2: 45 % mùn cưa + 40 % bã mía + 8% bột ngô + 6% cám gạo + 1% CaCO3
Công thức 3:45 % mùn cưa + 40 % bã mía + 2% trấu + 6% bột ngô + 6% cám gạo + 1% CaCO3
Công thức 4:45% mùn cưa + 40 % bã mía + 4% trấu + 4% bột ngô + 6% cám gạo + 1% CaCO3
Công thức 5:45% mùn cưa + 40 % bã mía + 6% trấu + 2% bột ngô + 6% cám gạo + 1% CaCO3
Học viện Nông nghiệp Việt Nam – Luận văn Thạc sỹ Khoa học Nông nghiệp Page 26
2.3.3.2. Thí nghiệm 8: Nghiên cứu ảnh hưởng của nguồn giống, tuổi giống đến sinh trưởng của nấm Ngọc châm
- Giống thể rắn: Giống đối chứng - giống đúng tuổi sử dụng (sợi nấm phủ kín bịch nguyên liệu 3 ngày).
- Giống dịch thể: Giống dịch thể đã xác định thời gian nuôi đạt hiệu quả nhất ở thí nghiệm trước.
2.3.3.3. Thí nghiệm 9: Ảnh hưởng của lượng giống thương phẩm đến sinh trưởng của nấm Ngọc Châm trên nguyên liệu nuôi trồng
Trong thí nghiệm này, chúng tôi sử dụng nguồn giống thương phẩm để cấy vào bịch nguyên liệu nuôi trồng (giống nấm Ngọc Châm đã xác định thời gian nuôi hiệu quả nhất).
Công thức 1:10ml/ bịch Công thức 5:30ml/ bịch Công thức 2:15ml/ bịch Công thức 4:25ml/ bịch Công thức 3:20ml/ bịch